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產(chǎn)品簡介
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒（BeyoClick™ EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488），是一種基于DNA合成過程中胸腺嘧啶脫氧核苷（thymidine）類似物EdU（5-ethynyl-2' -deoxyuridine）的摻入
詳細介紹
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(BeyoClick™ EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488)，是一種基于DNA合成過程中胸腺嘧啶脫氧核苷(thymidine)類似物EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)的摻入，并通過隨后的點擊反應(Click
reaction)使EdU被Alexa Fluor 488所標記,，從而實現(xiàn)簡單、快速、高靈敏地檢測細胞增殖的試劑盒,。
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒可以檢測到細胞或組織樣品中單個的增殖細胞，同時也可以對細胞或組織樣品總體的細胞增殖情況進行定量檢測,。本試劑盒可以檢測培養(yǎng)的細胞或組織樣品,，也可以檢測組織切片。
經(jīng)本試劑盒處理后,，增殖的細胞在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)非常明亮的綠色熒光,，可以用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡,、流式細胞儀或熒光酶標儀檢測,，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。流式細胞儀或熒光酶標儀檢測僅適用于細胞樣品,，不適用于組織切片,。
細胞增殖能力的檢測是評估細胞活性、基因毒性和抗腫瘤藥物效果等的基本方法,。*的zui精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成,。zui初廣泛使用的通過檢測DNA合成來檢測細胞增殖的方法是放射性標記核苷摻入法，如氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法,。但該方法由于有放射性污染并且很難實現(xiàn)單細胞檢測而受到很大的限制,，隨后逐漸被基于抗體檢測的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步驟繁多,，且需要使用BrdU抗體,，影響因素較多，穩(wěn)定性比較差,。并且由于BrdU法需要使用抗體,，有時會和其它目的蛋白基于抗體的檢測相互產(chǎn)生干擾。EdU法基于EdU摻入和后續(xù)的點擊反應,，無需使用抗體,、操作便捷、檢測靈敏度高,，是一種在BrdU法基礎上升級換代的新方法,，將會逐步取代BrdU法。
MTT法(C0009),、WST-1法(C0035,、C0036)、CCK-8法(C0037,、C0038,、C0039、C0040、C0041,、C0042,、C0043、
C0046)和CellTiter-Lumi™化學發(fā)光法(C0065,、C0068)都是基于細胞活性的細胞增殖檢測方法,，能檢測到細胞的總體增殖效果，但無法檢測到單個的增殖細胞,。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的,，但被廣泛用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDA SE法(C0051,、C1031)基于細胞熒光示蹤的原理能檢測到單個的增殖細胞,，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細胞,，檢測靈敏度不是很高,，通常僅適用于流式細胞儀檢測。在進行科學研究時,，上述這些基于細胞活性或CFDA SE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法,。
EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷,，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中,。另一方面,，EdU上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488、Azide Alexa Fluor 555,、Azide Alexa Fluor 594,、Azide Alexa Fluor 647等)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑環(huán),，該反應非常迅速,，被稱作點擊反應(Click reaction)，其反應原理參見圖1,。通過點擊反
應,，新合成的DNA會被相應的熒光探針所標記，從而可以使用適當?shù)臒晒鈾z測設備檢測到增殖的細胞,。
圖1. BeyoClick™ EdU檢測法中的點擊反應(Click reaction)原理圖,。熒光探針等標記的疊氮化物(Labeled Azide)與摻入到細胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價反應,，形成穩(wěn)定的三唑環(huán),，zui終使細胞DNA標記上熒光探針或其它探針,。
本試劑盒反應簡單、檢測靈敏度高,。本試劑盒基于簡單高效的點擊反應,，無需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標記出摻入的EdU,，并且可以檢測到單個細胞的增殖情況,。
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒使用便捷、兼容性好,。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進入細
胞并發(fā)生點擊反應,，不會影響細胞形態(tài),，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細胞周期,、DAPI或Hoechst染料檢測細胞核),。而BrdU法為了使大分子的BrdU抗體進入細胞并與DNA上的BrdU結(jié)合，需要對雙鏈DNA進行變性處理(如酸變性,、熱變性或者DNase消化等),，這種變性可能會影響細胞形態(tài)，影響后續(xù)的免疫熒光和免疫組化檢測,、DNA的熒光染色等,。BrdU法和BeyoClick™ EdU法檢測原理的比較參見圖2。
圖2. BrdU法和BeyoClick™ EdU法檢測原理的比較,。A. BrdU法需使用大分子的BrdU抗體,，由于空間位阻，雙鏈DNA須變性后才能使BrdU抗體與BrdU結(jié)合,。B. EdU法使用小分子標記的疊氮化物(Azide),，無需DNA變性，操作更便捷,，兼容性好,，檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
本試劑盒檢測快速,，定性定量檢測都非常便捷,。相對于至少需要4小時的BrdU法，本試劑盒采用的BeyoClick™ EdU法檢測新合成的DNA只需1.5-2小時,，時間上大大縮短,。本試劑盒同時提供了染色細胞核的Hoechst 33342，以方便染色觀察所有的細胞
核,?？梢允褂脽晒怙@微鏡或流式細胞儀等進行定性和定量檢測。HeLa細胞用本試劑盒和熒光顯微鏡檢測細胞增殖的效果參見圖3；Jurkat細胞用本試劑盒和流式細胞儀檢測細胞增殖的效果參見圖4,。
圖3. HeLa細胞用本試劑盒檢測細胞增殖的效果圖,。無EdU組觀察不到綠色熒光(zui左側(cè)一列)；EdU (10μM)孵育2小時組有明亮的綠色熒光(中間一列),；而用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)提前預處理0.5小時后,，綠色熒光顯著減弱，說明DNA合成抑制后,，EdU的摻入被顯著抑制(zui右側(cè)一列),。
圖4. Jurkat細胞用本試劑盒標記后用流式細胞儀檢測細胞增殖的效果圖。Jurkat細胞只用EdU標記(左圖),，或在標記的同時用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右圖),，2小時后用本試劑盒進行點擊反應，然后用流式細胞儀進行檢測,。從圖中可以看出,，僅EdU標記的細胞有較高比例的綠色熒光(488 fluorescence)陽性細胞，呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽性(強染
色)的兩個峰(左圖),，分別對應于未增殖細胞和增殖細胞,。經(jīng)過羥基脲處理的細胞，綠色熒光陽性的細胞幾乎*消失(右圖),，僅剩下一個綠色熒光陰性的峰(右圖),。該檢測結(jié)果說明DNA合成被抑制后，EdU的摻入也被抑制,。實測數(shù)據(jù)可能會因細胞類型,、細胞增殖情況、檢測儀器等的不同而存在差異,，圖中數(shù)據(jù)僅供參考,。
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒小包裝C0071S如果用于培養(yǎng)的細胞(6孔板)的檢測，可以檢測50個樣品,，每個樣品的反應體系為500μl的Click反應液,；如果用于96孔板檢測，可以檢測500個樣品,，每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應液,；如果用于12孔、24孔,、48孔或384孔板樣品的檢測,，分別可以檢測125、250,、350和1250個樣品,，每個樣品推薦的Click反應液用量為200μl,、100μl、70μl和20μl,。小包裝如果用于流式細胞儀檢測,，可以檢測50個樣品，每個細胞樣品的細胞數(shù)量宜為10-100萬,，每個樣品的反應體系為500μl的Click反應液,。小包裝如果用于冰凍或石蠟切片的檢測，可以檢測125-250個樣品,， 每個樣品的反應體系為100-200μl的Click反應液,。大包裝C0071L可檢測樣品的數(shù)量為小包裝C0071S的4倍。
包裝清單：
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
C0071L-1 EdU (10mM) 800μl
C0071L-2 Azide 488 220μl
C0071L-3 Click Reaction Buffer 120ml
C0071L-4 CuSO4 4.4ml
C0071L-5 Click Additive 1瓶
C0071L-6 Hoechst 33342 (1000X) 200μl
— 說明書 1份
保存條件：
-20℃保存,，一年有效,。Azide 488和Hoechst 33342須避光保存。
注意事項：
Click Additive配制成溶液后請注意適當分裝,。如果溶解后有白色物質(zhì)析出,，請上下顛倒多次,，待全部溶解后使用,。如果該溶液顏色變成棕色，說明該組分的有效成分已失效,，請棄用,。
如果需要使用羥基脲(Hydroxyurea)作為對照，可以從客服訂購
如果用于動物實驗需要更多EdU,，也可以訂購(ST067 EdU),。
BeyoClick™ EdU-488細胞增殖檢測試劑盒*于專業(yè)人員的科學研究用,，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。