詳細介紹
快速DNA連接試劑盒(Rapid DNA Ligation Kit) 是上海雅吉研發(fā)的一種把DNA段在短至5-10分鐘內(nèi)快速插入到載體(vector)中的連接試劑盒,。對于雙粘端DNA段的插入僅需5-10分鐘即可完成,,對于雙平端DNA段的插入僅需15分鐘即可完成。同時本試劑盒也可以用于其它各種常規(guī)的雙鏈DNA連接反應(yīng),。連接30分鐘即可達到*效果,,與連接過夜的效果*。
本試劑盒可以用于PCR片段和載體的連接,、酶切產(chǎn)物和載體的連接,、linker和載體的連接、linker和linker的連接等各種雙鏈DNA的連接,。
為了獲得快速高效的連接效果,,本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid T4 DNA Ligase以及相應(yīng)的快速連接緩沖液,確保在短時間內(nèi)可以獲得很好的連接效果,。連接30分鐘和連接過夜的效果相當,,通常只須連接5-10分鐘即可滿足常規(guī)用途(圖1)。
圖1.快速DNA連接試劑盒實測效果圖。雙酶切后的載體室溫自連30min(A)或16℃自連過夜(D)作為陰性對照,;雙酶切后的載體與待插入片段室溫連接10min(B),、30min(C)或者16℃連接過夜(E),隨后轉(zhuǎn)化細菌涂板,,并于第二天取平板觀察拍照,。
在確保連接效果的同時,確保完成連接后不必進行任何純化即可直接轉(zhuǎn)化細菌,。另外,,快速連接緩沖液中已經(jīng)含有ATP、鎂離子等各種必需物質(zhì),,無需再添加其它任何試劑。
用于總體積為10μl的連接體系時可以進行100個連接反應(yīng),,用于總體積為20μl的連接體系時可以進行50個連接反應(yīng),。
包裝清單:
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 包裝
D7002-1 快速連接緩沖液(2X) 0.5ml
D7002-2 Rapid T4 DNA ligase 50μl
— 說明書 1份
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
連接反應(yīng)完成后即可直接轉(zhuǎn)化細菌,,請勿采用加熱方法失活Rapid T4 DNA ligase,。加熱處理會導(dǎo)致后續(xù)的轉(zhuǎn)化效率顯著下降。
對于載體單酶切插入外源片段的情況,,需注意對載體進行脫磷處理,,以避免質(zhì)粒自連。
快速連接緩沖液(2X)使用前一定要*溶解并混勻,,加入到連接體系后也須注意混勻,。
*于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,,不得用于食品或藥品,,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。