詳細介紹
上海雅吉生物的質粒中量抽提試劑盒(Plasmid Midi Preparation Kit, Plasmid Midiprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進行中量質??焖俪樘岬碾x心柱式試劑盒。
本試劑盒適用于常用的EndA-菌株DH5A,、JM109和XL-1 blue等,。對于EndA+菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101
等,,可以順利完成質粒抽提,,但從EndA+菌株中抽提獲得的質粒會有輕微的核酸酶污染,如果在內切酶緩沖液中37℃孵育1小時會導致質粒全部降解,。從EndA+菌株中抽提質粒時推薦使用D0007S/D0007M 質粒小量抽提試劑盒(通用型),、D0020 質粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質粒大量抽提試劑盒(通用型)。
野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,,能切割并降解雙鏈DNA,。編碼Endonuclease I的基因是endA,如果endA突變失活,,其基因型會被標注為endA1,,相應的突變菌株被稱為EndA-菌株,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株,。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1,。從EndA+菌株中抽提的質粒,微量核酸酶和質粒結合而容易被共純化,,導致容易降解,。
采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下,,使質粒能在離心過柱的瞬間,,結合到質粒純化柱上,在一定條件下又能將質粒充分洗脫,,從而實現質粒的快速純化,。無需酚氯抽提,無需酒精沉淀,,12個樣品只需不足60分鐘即可完成,。
無需高速冷凍離心機,只需普通臺式高速離心機,。所有操作均可在1.5ml離心管中完成,。
每個質粒純化柱可以結合的質粒量的上限約為50微克。每個純化柱可用于抽提5-10毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌,。抽提所得質粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右,。抽提獲得的質粒量會受質粒拷貝數等因素影響,。抽提獲得的質粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動,。
本試劑盒抽提得到的質粒可直接用于轉染細胞,,DNA測序,,PCR,,基于PCR的突變,體外轉錄,,轉化細菌,,內切酶消化等。
包裝清單:
保存條件:
室溫保存,,一年有效,。
注意事項:
*次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中,混勻,,并在瓶上做好標記。加入RNase A后4℃存放,。
*次使用前在溶液IV (洗滌液)中加入27ml無水乙醇,,混勻,并在瓶上做好標記,。
溫度較低時,,溶液II和溶液III可能會有沉淀產生。使用前必須檢查一遍,。如有沉淀,,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用,。溶液II請勿過分劇烈混勻,,否則會產生大量氣泡。
溶液II使用完后,,一定要蓋緊瓶蓋,,防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性,,溶液II和溶液III對人體有刺激性,,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內,。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行,。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,,切勿中途丟棄。
本產品*于專業(yè)人員的科學研究用,,不得用于臨床診斷或治療,,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內,。
為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作。