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IHC,、ELISA 與 WB 實(shí)驗(yàn)之間的區(qū)別 你了解多少,？
閱讀：298 發(fā)布時(shí)間：2018-7-9免疫組化,、Western,、ELISA，免疫學(xué)三大工具,，分別用于定位,，定性和定量,。
IHC(免疫組化Immunohistochemistry)
是融合了免疫學(xué)原理(抗原抗體特異性結(jié)合)和組織學(xué)技術(shù)(組織的取材、固定,、包埋,、切片、脫蠟,、水化等),，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶,、金屬離子,、同位素)顯色，來對組織(細(xì)胞)內(nèi)抗原進(jìn)行定位,、定性及定量的研究(主要是定位),。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果,，可能出現(xiàn)膜陽性,、質(zhì)陽性和核陽性。
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)Enzyme linked immunosorbent assay)
用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,，待測的樣品多是血清,、血漿、尿液,、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù),，這是與免疫組化的主要區(qū)別,，操作上 開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,，這就是“吸附”的含義,。
WB (蛋白質(zhì)印跡Western Blot)
先要進(jìn)行SDS-PAGE，然后將分離開的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上,，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來檢測樣品,，可以用于定性和半定量。
對于IHC來說,，定位是免疫組化大的優(yōu)勢
該方法可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,，因而可同時(shí)對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,，相比于其他蛋白檢測方法,，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測分析方法對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義,，尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用,。
WB與IHC技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確
當(dāng)然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白,、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位),，但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于IHC,。
ELISA與免疫組化技術(shù)相比，定量準(zhǔn)確,，是分泌性蛋白檢測方法之一,。
尤其對于微定量分析多個(gè)樣本非常有用，所用試劑和樣品量很少,，結(jié)果,。IHC針對性比較強(qiáng)，而且一般是以組織或者細(xì)胞為樣本,，而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液,。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性，一般不用于定量檢測,。