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斑點金免疫滲濾測定(DIGFA)實驗
閱讀:863 發(fā)布時間:2019-5-10實驗方法原理
斑點金免疫滲濾測定實驗是在斑點免疫滲濾測定法基礎上,,改用膠體金標記物代替酶,,省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜(NC膜)為載體,,將試劑及標本滴加在膜上,,通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成,,陽性結果在膜上呈紅色斑點,。
實驗材料 細胞樣品
試劑、試劑盒 PBS吐溫-20BSA特異性抗體 抗原金標抗體
儀器,、耗材 滲濾裝置NC膜
實驗步驟
一,、試劑及材料
1. 滲濾裝置:為一塑料小盒(4x3x0.6 cm),分為底,、蓋兩層,,蓋的中央有一個直徑0.5 cm的小孔,。盒底充填吸水性較強的墊料,蓋孔下,,緊貼墊料放置一片NC膜,。緊閉盒蓋,即為滲濾裝置,。在孔中的NC膜上點加1-2 ml特異性抗體(一抗)或抗原,,室溫自然干燥,保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用,。
2. 封閉液:含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液,。
3. 洗滌液:50 mol/L,pH7.2 PBS,。
4. 特異性抗體(一抗)或抗原
5. 金標抗體
二、操作方法
1. 取出滲濾器,,先在小孔的NC膜上,,滴加2滴(約100 ml)封閉液;
2. 待其滲入盒內,,在NC膜上,,加待檢標本1滴(約50 ml);
3. 待其滲入盒內,,在NC膜上,,滴加2滴(約100 ml)洗滌液;
4. 待其滲入盒內,,在NC膜上,,加金標抗體1滴(約50 ml),使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應,;
5. 待其滲入盒內,,在NC膜上,滴加2滴(約100 ml)洗滌液,;
6. 至洗滌液*滲入盒內
三,、結果觀察
在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應時為陽性反應,陰性反應不著色,。
收起
注意事項
1. 特異性抗體(一抗)或抗原,、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定適用量。