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一種能夠通過胎盤存在于血小板表面的免疫球蛋白，被稱為血小板相關(guān)抗體（PA-IgG）,。本實(shí)驗(yàn)來源「實(shí)用流式細(xì)胞術(shù)彩色圖譜」 王書奎,、周振英主編。
實(shí)驗(yàn)方法原理    一種能夠通過胎盤存在于血小板表面的免疫球蛋白,，被稱為血小板相關(guān)抗體（PA-IgG）。
實(shí)驗(yàn)材料    羊 F（ab+）2 2 IgG-PE抗體血樣
試劑、試劑盒    洗滌緩沖液
儀器,、耗材    流式細(xì)胞儀
實(shí)驗(yàn)步驟    
一、試劑

洗滌緩沖液（PBS/EDTA/BSA）,，PBS 緩沖液,，含 10 mmol/L EDTA 和 0.5% BSA。

抗體：羊 F（ab+）2 抗-人 IgG（Fc Sp）-R-PE（H10104,，Caltag 為多克隆抗體）,。

陰性對(duì)照：羊 F（ab+）2 2 IgG-PE（11304，Caltag）,。

二,、樣本

正常人血樣 1 份，血小板數(shù)值在正常范圍,，具體數(shù)目不詳,。

患者血樣 2 份，為 1 個(gè)月齡的雙胞胎患者 1 和患者 2,，均為貧血血小板,，具體數(shù)目不詳。

三,、步驟

1. 用含 EDTA 抗凝劑的血液收集管采血,，3 個(gè)血樣均取 2 ml，分別加到 3 支流式標(biāo)準(zhǔn)管中,。

2. 離心 500 r/min,，將上清（富血小板血漿）轉(zhuǎn)到另外 3 支流式標(biāo)準(zhǔn)管中,。

3. 離心 2500 r/min 3 min。吸去血漿,，用與血漿等體積的洗滌緩沖液重懸血小板,。如果必要，可用旋渦混合器混勻,。

4. 用洗滌緩沖液洗滌血小板 3 次,，每次離心 2500 r/min 3 min。

5. 適量洗滌緩沖液重懸血小板,，用血球計(jì)數(shù)儀測(cè)定血小板的濃度,，其中正常血樣血小板計(jì)數(shù)為 2000 /ul，患者 1 的血小板數(shù)為 6000 /ul,，患者 2 的血小板數(shù)為 7000 /ul（稀釋濃度）,。

6. 每個(gè)含重懸血小板的流式標(biāo)準(zhǔn)管分為兩管。A 管為檢測(cè)管,，B 管為陰性對(duì)照管,，共 6 只管。正常人血樣分別取 250 ul 于 2 支 流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中,，每管血小板總數(shù)為 5x106,。分別取 80 ul 患者 1 的血樣于 2 支流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中，每管血小板總數(shù)為 4.8x106,。分別取 70 ul 患者 2 的血樣于 2 支流式標(biāo)準(zhǔn)管（A 管和 B 管）中,，每管血小板總數(shù)為 4.9x106。

7. 將上述 6 支流式標(biāo)準(zhǔn)管,，于 A 管均加 5 ul 羊 F（ab+）2 抗-人 IgG（Fc Sp）,，B 管均加 5 ul 羊 F（ab+）2 IgG。

8. 室溫,，避光孵育 15 min,。用洗滌緩沖液再洗 1 次，方法同步驟 4,。

9. 去上清,，加 0.5 ml 洗滌緩沖液重懸，上機(jī)分析,。