日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

 實驗方法原理

將小鼠的肝細胞從機體中取出,，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細胞得以生存、生長和繁殖,。 

實驗材料小鼠

試劑,、試劑盒DMEM無血清DMEM培養(yǎng)基胰酶PBS

儀器、耗材飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器

實驗步驟

1. 將小鼠斷頸致死,，置75%酒精泡2-3秒鐘,，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中,。

2. 剔除脂肪,、結(jié)締組織、血液等雜物,，轉(zhuǎn)移到另一個盛有PBS液的平皿中,。

3. 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊（大小約1mm2），玻片研磨,，轉(zhuǎn)到離心管,，離心（1 000 rpm,，5 min）。

4. 視組織或細胞量加入5-6倍（3-5 ml）胰酶,，37℃中消化20分鐘,，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次,，使細胞分離,。

5. 加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。

6. 用100目孔徑濾網(wǎng)濾過,，除去未消化的大組織塊,。

7. 再次離心5 min，棄上清液,。

8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml,，沖散細胞，再離心一次,，棄上清液,。

9. 加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml（視細胞量），血球計數(shù)板計數(shù),。

10.  將細胞調(diào)整到5×105/ml左右,，轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng),。

收起 

注意事項

1. 自取材開始,，保持所有組織細胞處于無菌條件,。細胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行,。

2. 在超凈臺中，組織細胞,、培養(yǎng)液等不能暴露過久,，以免溶液蒸發(fā)。

3. 凡在超凈臺外操作的步驟,，各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,，以防止細菌落入。

4. 操作前要洗手,，進入超凈工作臺后要用75％酒精或0.2％新潔爾滅擦拭手,。試劑瓶口也要擦拭。

5. 點燃酒精燈,，操作在火焰附近進行,，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長,，以免退火,，且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜,。

6. 操作動作要準確敏捷,，但又不能太快，以防空氣流動,，增加污染機會,。

7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分，工作臺面上的用品擺放要布局合理,。

8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位,。

9. 吸溶液的吸管等不能混用。