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人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
48T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體
(N.meningitides Ab)表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides)Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides Ab)表達(dá),。
用純化的抗原包被微孔板,， 制成固相抗原， 可與樣品中腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體
(N.meningitides Ab)相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的抗原
結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP
酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測
定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體
(N.meningitides Ab)的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑3ml×1 瓶8 陽性對照0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×4 條9 陰性對照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去,，如此
重復(fù)5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides)Elisa試劑盒說明書
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides
Ab)陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides
Ab)陽性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M 的硫酸，使用時必須
注意安全,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月

人腦膜炎發(fā)奈瑟氏菌抗體(N.meningitides)Elisa試劑盒說明書