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人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)Elisa試劑盒說明書

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人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
48T
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)表
達。
實驗原理
人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)表達,。用純化的抗
原包被微孔板,,制成固相抗原,可與樣品中流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)相結(jié)合,,經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)
合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,與CUTOFF 值
相比較,,從而判定標(biāo)本中人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑3ml×1 瓶8 陽性對照0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×4 條9 陰性對照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不
觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)Elisa試劑盒說明書
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值),。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
計算和結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)陰

陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)陽

注意事項
1.操作嚴(yán)格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),,使用雙波長檢測時,,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M 的硫酸,,使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6 個月

人流行性出血熱病毒抗體(EHF Ab)Elisa試劑盒說明書

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