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小鼠多能ES細胞的增殖實驗
閱讀：251 發(fā)布時間：2018-12-28| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.4KB |
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試劑、試劑盒 PBS胰酶溶液
儀器、耗材 MEF 滋養(yǎng)板巴斯德吸管ES 生長培養(yǎng)基
實驗步驟
1. 準備下列試劑和材料：
60 mm MEF 滋養(yǎng)板（接種不能超過 7 天）
帶棉塞無菌巴斯德吸管
無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS
ES 生長培養(yǎng)基
胰酶溶液
2. PBS 沖洗 ES 細胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養(yǎng)皿底（2 ml/p60）
3. 37℃ 孵育 5 分鐘左右,，至細胞脫落。
4. 巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細胞 4~6 次，分散 ES 細胞,。分散的細胞,，包括單細胞和小的細胞團，轉(zhuǎn)移至裝有 2 ml 預(yù)熱（37℃）ES 生長培養(yǎng)基的 15 ml 離心管,。
5. 離心收集細胞,。吸掉上清，留約兩倍于細胞沉淀的體積,。輕彈離心管懸浮細胞,。加 10 ml ES 生長培養(yǎng)基，吹吸至懸液均勻,。
6. 計數(shù)細胞,。由于 ES 細胞較 MEF 細胞小，呈圓形,，二者很容易區(qū)分,。
7. ES 細胞接種 60 mm MEF 滋養(yǎng)板。吸掉 MEF 滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)基,，加入懸于 5 ml ES 生長培養(yǎng)基的 ES 細胞,。
8. 每天換一次液，加 5 ml ES 生長培養(yǎng)基,。