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培養(yǎng)細胞單細胞懸液的制備

實驗材料    胰蛋白酶細胞
試劑,、試劑盒    EDTA·2NaPBS
儀器、耗材    離心管
實驗步驟    
一,、培養(yǎng)細胞的特征

一般細胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng),，由于細胞的增殖有可能形成大小不等的細胞團塊或連接成片。如果兩個或多個細胞粘連在一塊或細胞碎片過多都將影響 FCM 結(jié)果,，進而導(dǎo)致實驗失敗,。所以，制備合格的培養(yǎng)細胞單細胞懸液十分重要,。

二,、培養(yǎng)細胞樣品的制備程序

1. 將培養(yǎng)細胞用 0.04% 乙二胺四乙酸二鈉鹽（EDTA·2Na）或 0.29% 胰蛋白酶消化 3~7 min（根據(jù)室溫情況而定），至光鏡下見到貼壁細胞間出現(xiàn)篩狀間隙為止,，棄去消化液,，加 PBS 液。

2. 用吸管將細胞從瓶壁上輕輕吹打下來,，并移入離心管中,。

3. 短時低速離心，即 800~1000 r/min,，5 min,。

4. 棄上清，加 pH 7.4 的 PBS 液 5~8 ml,，低速短時離心,，800~1000 r/min 離心 3~5 min；重復(fù) 2~3 次,，以去除細胞懸液中的細胞碎片,。

5. 加少許 PBS 液，將沉淀細胞輕輕吹打均勻,。加固定液或低溫保存待用,。