日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

大鼠MSCs的培養(yǎng)基本上與人MSCs的培養(yǎng)方法相同,，只有少許差異。人和大鼠MSCs擴增方案的主要區(qū)別是,，大鼠MSCs在單層細胞40%?50%匯合時傳代,，而人的細胞可以在密度達到50%?60%匯合后傳代。這是因為,，培養(yǎng)中過度的細胞間接觸會使大鼠MSCs的增殖和多向分化潛能顯著下降,。收集大鼠MSCs時，骨髓細胞應取自新處死動物的長骨,。用實驗方法原理    

實驗材料    大鼠骨髓
試劑,、試劑盒    滅菌CCM含0.2μg ml兩性霉素B(兩性霉素B洗劑）紗布含100U ml青霉素100μg ml鏈霉素和0.2μg ml兩性霉素B的PBSA無鎂和鈣的Hank’s平衡鹽溶液（HBSS)
儀器、耗材    塑料Petri培養(yǎng)皿 15 cm直徑裝有#10和#15刀片的解剖刀1和2英尺刀刃的手術剪鑷子止血鉗15 cm刀刃的咬骨鉗帶Luer接頭的注射器20ml皮下注射針 23號和18號微量離心管1.5ml和0.5ml聚丙烯離心管CO2嚙齒動物小室
實驗步驟    
(a)CO2窒息處死動物,，切勿使用藥物,。

(b)用酒精擦拭后肢，在不破壞股骨的情況下解剖后肢,。將股骨從肢體中分出來,。

(C)切除股骨上的肌肉和肌腱。用無菌紗布擦拭除去骨上的剩余組織,。

(d)用酒精擦拭已清理干凈的骨,，將其放人50 ml塑料管中。

(e)用含抗真菌藥物的冰浴CCM浸沒骨,，直到骨髓提取準備完畢,。從分離骨到骨髓提取的時間應盡量縮短。

(f)裝有股骨的離心管移至微生物安全廚中,，將骨放人15 cm petri培養(yǎng)皿中,。

(g)按如下步驟提取骨髓：用咬骨鉗剪掉骨的兩端,，暴露內部骨髓。裝有23G針頭的注射器中吸人5ml含抗真菌藥物的CCM,，向50ml離心管中沖洗每根股骨,。吸取沖洗后的CCM，反復沖洗股骨3次,，將其轉移至15 ml離心管中,。1000g離心，用1ml含抗真菌藥物的CCM重懸骨髓沉淀,。在15 ml離心管中將1 ml骨髓細胞懸液加入到4 ml含抗生素和抗真菌藥物的新鮮PBSA中,。每根股骨所得的5ml細胞懸液可混合于同一個離心管中。

(h)在l0℃1000g離心骨髓細胞10 min,用10ml含抗生素和抗真菌藥物的PBSA洗滌細胞3次,。

(i)后,，用5 mlCCM重懸骨髓細胞，置于冰上,。