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大鼠MSCs的培養(yǎng)基本上與人MSCs的培養(yǎng)方法相同,，只有少許差異,。人和大鼠MSCs擴(kuò)增方案的主要區(qū)別是,，大鼠MSCs在單層細(xì)胞40%?50%匯合時傳代,，而人的細(xì)胞可以在密度達(dá)到50%?60%匯合后傳代,。這是因為，培養(yǎng)中過度的細(xì)胞間接觸會使大鼠MSCs的增殖和多向分化潛能顯著下降,。收集大鼠MSCs時,，骨髓細(xì)胞應(yīng)取自新處死動物的長骨。用實驗方法原理    

實驗材料    大鼠骨髓
試劑,、試劑盒    滅菌CCM含0.2μg ml兩性霉素B(兩性霉素B洗劑）紗布含100U ml青霉素100μg ml鏈霉素和0.2μg ml兩性霉素B的PBSA無鎂和鈣的Hank’s平衡鹽溶液（HBSS)
儀器,、耗材    塑料Petri培養(yǎng)皿 15 cm直徑裝有#10和#15刀片的解剖刀1和2英尺刀刃的手術(shù)剪鑷子止血鉗15 cm刀刃的咬骨鉗帶Luer接頭的注射器20ml皮下注射針 23號和18號微量離心管1.5ml和0.5ml聚丙烯離心管CO2嚙齒動物小室
實驗步驟    
(a)CO2窒息處死動物,，切勿使用藥物。

(b)用酒精擦拭后肢,，在不破壞股骨的情況下解剖后肢,。將股骨從肢體中分出來。

(C)切除股骨上的肌肉和肌腱,。用無菌紗布擦拭除去骨上的剩余組織,。

(d)用酒精擦拭已清理干凈的骨，將其放人50 ml塑料管中,。

(e)用含抗真菌藥物的冰浴CCM浸沒骨,，直到骨髓提取準(zhǔn)備完畢。從分離骨到骨髓提取的時間應(yīng)盡量縮短,。

(f)裝有股骨的離心管移至微生物安全廚中,，將骨放人15 cm petri培養(yǎng)皿中。

(g)按如下步驟提取骨髓：用咬骨鉗剪掉骨的兩端,，暴露內(nèi)部骨髓,。裝有23G針頭的注射器中吸人5ml含抗真菌藥物的CCM，向50ml離心管中沖洗每根股骨,。吸取沖洗后的CCM，反復(fù)沖洗股骨3次,，將其轉(zhuǎn)移至15 ml離心管中,。1000g離心，用1ml含抗真菌藥物的CCM重懸骨髓沉淀,。在15 ml離心管中將1 ml骨髓細(xì)胞懸液加入到4 ml含抗生素和抗真菌藥物的新鮮PBSA中,。每根股骨所得的5ml細(xì)胞懸液可混合于同一個離心管中。

(h)在l0℃1000g離心骨髓細(xì)胞10 min,用10ml含抗生素和抗真菌藥物的PBSA洗滌細(xì)胞3次,。

(i)后,，用5 mlCCM重懸骨髓細(xì)胞，置于冰上,。