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實驗方法原理    SD胎鼠腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)7 d ,，微量移液器塑料滴頭于培養(yǎng)孔內(nèi)機械性劃割培養(yǎng)之神經(jīng)元,，依劃割程度不同分為輕,、中,、重3組，對照組除不進行機械性劃割,，其余處理同損傷組,，傷后不同時間點（10，30 min ,， 1,，3，6,，12，24 h）檢測細胞存活率及培養(yǎng)液上清乳酸脫氫酶(LDH)含量,。
實驗材料    SD大鼠
試劑,、試劑盒    硼酸硼砂緩沖液胰酶-EDTA 消化液D-Hanks’
儀器、耗材    眼科剪滴管離心機培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱
實驗步驟    
一,、實驗步驟
 
1. 孕16 d SD 大鼠經(jīng)麻醉后,，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚,，依次剪開皮膚,、肌肉,、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的 D-Hanks’平衡鹽液中,。
 
2. 在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層,，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3 大小,，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱內(nèi)消化20 min,，中間搖晃一次。
 
3. 隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液(DMEM＋10%FBS)的離心管內(nèi)終止消化液作用5 min,。
 
4. 用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的 DMEM＋10%FBS 的離心管內(nèi),，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi),。重復(fù)上述步驟 2～3 次,。
 
5. 將所收集的上清經(jīng)200 目篩網(wǎng)過濾。
 
6. 過濾后的細胞懸液于800 rpm 離心5 min,，棄上清,，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液(DMEM＋20%FBS)并吹打 成單細胞懸液。
 
7. 細胞計數(shù),，調(diào)整細胞密度按1.5×105/cm2  種入6 孔板內(nèi),，放入CO2 孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h 后換液并 加入Ara-C使其終濃度為 1×10-5 mM/L,。Ara-C作用24 h 后全量換液,。以后每隔 3 天半量換液一次。
收起 
注意事項    
1. 上面的步驟是傳統(tǒng)方法,。有許多地方可以進行改動：如消化時可以直接用0.125-0.25%的胰酶消 化15-20 min 左右,，也可用 DNA 酶進行消化，有人還直接進行吹打,，都可行,。
 
2. 上面雖然時大鼠皮層神經(jīng)元，但是同樣適用于小鼠,，但是應(yīng)該選擇孕13 d 左右的小鼠,。
 
3. 神經(jīng)元是一種比較難培養(yǎng)的細胞，因此在接種時細胞的密度一定要夠,。
 
4. 在玻片上培養(yǎng)神經(jīng)元時,，一定要注意玻片的來源和處理方法，這個非常重要,，對神經(jīng)細胞的影響 是很大的,。如果您現(xiàn)在在玻片上培養(yǎng)的神經(jīng)元生長情況還不錯的話，那么您在以后的培養(yǎng)中還是用同 一來源(廠家)的玻片,。
 
5. 如果有B27 和neurobasal 培養(yǎng)基,，那么就方便了(不用加 AraC):
 
(1)把細胞懸液用(DMEM＋20%FBS)懸浮,，種到培養(yǎng)皿上6－12 h 后，全量換成 2% B27 的 neurobasal 培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng),，3 d 半量換液。
 
(2)把細胞懸液用直接用 2% B27 的 neurobasal 培養(yǎng)基懸浮接種,。
 
(3)可以用新生1 d 內(nèi)的胎鼠皮層直接培養(yǎng),。