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大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實驗
閱讀:198 發(fā)布時間:2018-12-12實驗方法原理 運用組織塊貼壁法進(jìn)行SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng),,并用倒置相差顯微鏡觀察,、HE染色后形態(tài)學(xué)觀察以及用免疫組化對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,。
實驗材料 SD大鼠
試劑,、試劑盒 PBSFBSDMEM
儀器,、耗材 手術(shù)剪手術(shù)鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術(shù)刀培養(yǎng)皿
實驗步驟
一,、實驗步驟
1. SD 大鼠(150-200 g),斷頭,,浸入75%的酒精中15 min,。
2. 置入超凈臺中,將大鼠固定于殺鼠板上,,在無菌條件下打開腹腔,,分離出胸主動脈、腹主動脈, 摘出,。
3. PBS 清洗3 遍,,剝?nèi)ネ饽ぃ檬中g(shù)刀片刮去內(nèi)膜,,留下中膜并將其移入1 mL 的培基中,、剪成1×1 mm2 大小組織塊。
4. 再將PBS清洗組織塊,,移入25 mL 的培養(yǎng)瓶中,,用尖嘴彎管均勻貼好組織塊,放入37℃,、5% CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6 小時后,,待組織塊貼壁后,再加入2.5 mL 培養(yǎng)液后放回培養(yǎng)箱中,。
5. 隨后每3 天予以全量換液,。
二、結(jié)果
3-5 天后可見組織塊周圍有細(xì)胞爬出,,大約2 周后80-90%融合,。
收起
注意事項
第四步中后加入2 mL 培養(yǎng)液時應(yīng)使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下,勿使組織塊吹下,。