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大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
閱讀：186 發(fā)布時(shí)間：2018-12-12| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 250.8KB |
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實(shí)驗(yàn)方法原理 運(yùn)用組織塊貼壁法進(jìn)行SD大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng),，并用倒置相差顯微鏡觀察,、HE染色后形態(tài)學(xué)觀察以及用免疫組化對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,。
實(shí)驗(yàn)材料 SD大鼠
試劑,、試劑盒 PBSFBSDMEM
儀器,、耗材 手術(shù)剪手術(shù)鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術(shù)刀培養(yǎng)皿
實(shí)驗(yàn)步驟
一,、實(shí)驗(yàn)步驟
1. SD 大鼠(150-200 g)，斷頭,，浸入75%的酒精中15 min,。
2. 置入超凈臺(tái)中，將大鼠固定于殺鼠板上,，在無(wú)菌條件下打開(kāi)腹腔,，分離出胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈,， 摘出,。
3. PBS 清洗3 遍，剝?nèi)ネ饽?，用手術(shù)刀片刮去內(nèi)膜,，留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1×1 mm2 大小組織塊,。
4. 再將PBS清洗組織塊,，移入25 mL 的培養(yǎng)瓶中，用尖嘴彎管均勻貼好組織塊,，放入37℃,、5% CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6 小時(shí)后，待組織塊貼壁后,，再加入2.5 mL 培養(yǎng)液后放回培養(yǎng)箱中,。
5. 隨后每3 天予以全量換液。
二,、結(jié)果
3-5 天后可見(jiàn)組織塊周圍有細(xì)胞爬出,，大約2 周后80－90%融合。
收起
注意事項(xiàng)
第四步中后加入2 mL 培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)使其順無(wú)組織塊的皿邊緣緩慢流下,，勿使組織塊吹下,。