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轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。

理想細胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,，病毒轉(zhuǎn)染方法的準備程序復(fù)雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性,，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點,。

需要指出的一點，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),，要獲得的轉(zhuǎn)染結(jié)果,，可能都需要對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,，從細胞類型,、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié),，都需要考慮,。

一、細胞傳代

1. 試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),，酒精棉球,，廢液缸，試管架,，微量移液器,，記號筆，培養(yǎng)皿,，離心管,。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次,。

3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液,，消化1分鐘(37℃，5%CO2 ),。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,，觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。

4. 加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng),。

5. 用Tip頭多次吹吸,，使細胞*分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中,，1000rpm離心5min,。

7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿,。

8. 將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中,，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，第二天轉(zhuǎn)染,。

二、細胞轉(zhuǎn)染

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備

① 將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩,。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。

5. 加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。

6. 到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時,。

三,、第二次細胞傳代

1. 在轉(zhuǎn)染后24小時，觀察實驗結(jié)果并記錄綠色熒光蛋白表達情況,。

2. 再次進行細胞傳代,，按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養(yǎng)皿將細胞重新轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中。

3. 在正常條件下培養(yǎng)24小時后按照染色要求條件固定,。