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熒光法測(cè)定DNA濃度
閱讀：1471 發(fā)布時(shí)間：2018-9-19| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 268.1KB |
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這種染料使用僅結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料來測(cè)量DNA濃度,。當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí),，這種染料的熒光被大大放大,。
1。打開信標(biāo)2000儀器,，讓它預(yù)熱30分鐘至1小時(shí),，然后采取任何測(cè)量。
2,。為了生成標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將下列量的DNA分為Eppnordf管：
30納克，20納克,，10納克,，5納克，2.5納克,，1納克,，0.5納克。還需要2個(gè)沒有DNA的管,。一個(gè)管將接收染料，另一個(gè)將不接收染料（空白）,。
DNA可以在TE中稀釋,，但添加到試管中的大體積應(yīng)為5微升或更少。
三,。在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)（優(yōu)選在該范圍的中點(diǎn)）的未知DNA對(duì)管的等量,。
4。向每個(gè)試管中加入200微升PanVera DNA分析緩沖液并充分混合（重要：DNA分析緩沖液必須使用,，H20或其他緩沖液不能工作）,。
5。在信標(biāo)2000中準(zhǔn)備和標(biāo)記用于熒光測(cè)量的玻璃管,。
6,。添加6微升PANVRA DNA檢測(cè)染料到每個(gè)反應(yīng)和渦流（染料可以添加到所有的管，然后所有樣品讀??；在染料添加10分鐘內(nèi)，值沒有顯著改變）,。
7,。在染料加入10分鐘內(nèi)測(cè)定總強(qiáng)度值。使用程序γ3（靜態(tài)測(cè)量用23度的單個(gè)空白值）,。
8,。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是線性的。從標(biāo)準(zhǔn)曲線中確定未知的DNA濃度,。