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一,、原理

    在體外培養(yǎng)基中由一個(gè)祖先細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞團(tuán),，稱之為集落,。腫瘤細(xì)胞能無(wú)限繁殖,，所以具有這種能力，而成熟分化的細(xì)胞則不能形成集落,。HL一60細(xì)胞是一種急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞,，在體外無(wú)需加刺激因子，可在軟瓊脂培養(yǎng)基中形成集落,。二甲基亞砜是一種細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑,，經(jīng)二甲基亞砜處理后的HL一60細(xì)胞按粒系途徑定向成熟分化，同時(shí)細(xì)胞的增殖力降低,，幾乎全部細(xì)胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力,。因此，這種方法可用于細(xì)胞分化的基礎(chǔ)研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗(yàn)等方面,。
    二,、操作
    1．收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL一60細(xì)胞，先按實(shí)驗(yàn)十三測(cè)定細(xì)胞活力,，然后調(diào)整細(xì)胞濃度,，制成300～1000活細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液。
    2．取二個(gè)培養(yǎng)瓶每個(gè)瓶中加9ml調(diào)整好濃度的細(xì)胞懸液,，然后各加入1ml3％瓊脂(已融化,，在65℃水浴中放置)，迅速加入,，混勻,。
    3．用微量加樣器吸140μl二甲基亞砜(MDSO)，加到一個(gè)瓶中，充分混勻,，為實(shí)驗(yàn)組,，另一瓶不加DMSO，為空白對(duì)照組,。
    4．取一個(gè)16mm多孔培養(yǎng)板,，每孔加1ml(35mm培養(yǎng)皿需加2ml)細(xì)胞瓊脂懸液，勿有氣泡,，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分兩組加好,，蓋上蓋并作好標(biāo)記。
    5．在室溫放置20分鐘使細(xì)胞瓊脂懸液凝固,。
    以上各步驟均在無(wú)菌條件下進(jìn)行,。
    6．然后移培養(yǎng)板或平皿于CO2培養(yǎng)箱中37℃進(jìn)行培養(yǎng)。
    7．培養(yǎng)7～lO天,，肉眼觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞集落,。
    三、結(jié)果
    以肉眼可見(jiàn)的細(xì)胞團(tuán)(含500個(gè)以上細(xì)胞)作為計(jì)數(shù)集落的標(biāo)準(zhǔn),。對(duì)照組HL一60細(xì)胞在含0.3％的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好,每個(gè)孔中可見(jiàn)有多個(gè)集落形成,，而實(shí)驗(yàn)組HL一60細(xì)胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導(dǎo)分化，細(xì)胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少,。
    四,、集落的計(jì)數(shù)和計(jì)算
    集落數(shù)=n孔中細(xì)胞集落數(shù)總和/n孔
    集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100％