日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

在實驗室進行分子克隆實驗時,，經(jīng)常需要合成大量的引物,，而這些合成的引物首先要進行適當?shù)南♂尣拍苁褂?。如果不稀釋就使用引物，往往造成引物的浪費和過早的活性喪失,，更有一些被污染而不能使用。

因此,，建議對合成的引物先進行稀釋,，然后使用。稀釋的引物利于保存和應用,。

現(xiàn)將方法簡單敘述如下：

1. Oligo DNA是以OD260單位來計算的,，這是指在1ml體積1cm光程標準比色皿中,，260nm波長下吸光度為1A260的Oligo溶液定義為1 OD260單位，根據(jù)此定義,，1 OD260單位相當于33μg的Oligo DNA,，您可以根據(jù)此數(shù)據(jù)和您的Oligo DNA分子量，計算得到摩爾數(shù)以計算不同摩爾濃度的溶液,。

2. 引物序列的分子量計算公式如下：

MW=（A堿基數(shù)×312）+（C堿基數(shù)×288）+（G堿基數(shù)×328）+（T堿基數(shù)×303）-61

例如：引物TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG   A=1  C=3  G=11  T=6

MW=（1×312）+（3×328）+（6×303）-61=6541

3. Oligo DNA的分子量也可以用以下近似方法計算：Oligo DNA中的每個脫氧核苷酸堿基的平均分子量近似為324.5,，則一條Oligo DNA的分子量=堿基數(shù)×324.5。

例：

您得到一管標為5 OD260的20 mer Oligo DNA

分子量=20×324.5=6490

質(zhì)量數(shù)=5×33=165μg

摩爾數(shù)=165/6490=0.025μmol=25nmol

若加滅菌雙蒸水400μl溶解,，則濃度為25nmol/400μl=62.5μM

4. 裝有引物的eppendorf管一般保存于-20℃,，臨用前稀釋。

5. 由于Oligo DNA呈很輕的干膜狀附在管壁上,，打開時極易散失,，所以打開管子前請先離心10,000rpm,1min,然后再慢慢打開管蓋。

6. 在裝有引物的eppendorf管內(nèi)加入100-500μl雙蒸水,，蓋上管蓋,，充分上下振蕩5-10分鐘，再次離心10,000rpm,1min,。

7. 計算原引物管primer的濃度（必要時測OD260核對廠家提供引物量是否正確）,。

8. 計算并將應用primer稀釋為10pmol/μl。

9. 標明原引物管,、應用引物管,、稀釋方法，置-20℃保存,。