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16HBE 人支氣管上皮細(xì)胞 使用說明書
支氣管上 皮 貼壁
所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請注意防護(hù)
培養(yǎng)基：美國sciencell 角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基，貨號： 2101
溫度：37℃
氣相：95%空氣,，5%二氧化碳
收到細(xì)胞后,，請對細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時(shí)的緩沖,，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后,，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：
（一）細(xì)胞未長至 85%時(shí),，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到生物操作臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，若培養(yǎng)瓶上無特殊標(biāo)注,，吸去剩余培養(yǎng)液,，只留 6-8ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
（二）細(xì)胞已長滿（達(dá) 85-95%）,。即可進(jìn)行傳代,，具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次,，
2.加入 1.0ml 胰酶消化液,，37℃消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞回縮變圓,、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落,，則迅速拿回操作臺(tái),，加入雙倍的含 10%血清的*培養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細(xì)胞,，使其變成單細(xì)胞懸液,，
3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清,，輕彈管底,，將細(xì)胞彈散，
4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代,、凍存，
5.如果沒有特別說明,，建議收到細(xì)胞后的次傳代比例為 1:2,。
注：1.觀察細(xì)胞密度用（4X 物鏡）低倍鏡觀
察，以便正確的判斷細(xì)胞密度,；觀察細(xì)胞形態(tài)請用
（10X 或 20X）高倍鏡觀察,；
2.瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng),；
3.有些細(xì)胞貼壁不牢,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內(nèi),；
4.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污染,，請及時(shí)與我們聯(lián)系,。
凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清
+10%DMSO
保存條件：液氮存儲(chǔ)

經(jīng)供研究之用
1.培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染,，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決,。
2.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。1-2 小時(shí)后觀察， 如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長至匯合度 85-95%,，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁,， 將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),，直到問題解決。