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細(xì)胞傳代培養(yǎng)
閱讀：221 發(fā)布時(shí)間：2018-7-19| 提 供 商 | 上海雅吉生物科技有限公司 | 資料大小 | 61.1KB |
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| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 221次 |
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實(shí)驗(yàn)材料
無菌磷酸生理緩沖液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline, Ca /Mg free, D-PBS,GibcoBRL 21600-010)
trypsin-EDTA solution (0.05% trypsin-0.53mM EDTA-4Na, GibcoBRL 25300-062)：以10 ml 分裝于15 ml 無菌離心管中,，保存于–20 oC,，使用前放在37℃水槽回溫,。
新鮮培養(yǎng)基
無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶
實(shí)驗(yàn)步驟
1 附著型胞(adherent cell)
1.1 吸掉舊培養(yǎng)液,。
1.2 用D-PBS 洗滌細(xì)胞一至二次,。
1.3 加入trypsin-EDTA 溶液(1ml/25cm2, 2ml/75cm2)，37 oC 作用數(shù)分鐘,，于倒立顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞將要分離而呈現(xiàn)圓粒狀時(shí),，吸掉trypsin-EDTA 溶液,。(若不移去trypsin-EDTA，則在trypsin-EDTA 作用后,，加入適量含血清之新鮮培養(yǎng)基終止trypsin 作用,，離心后再吸掉上清液。)
1.4 輕拍培養(yǎng)瓶使細(xì)胞自瓶壁脫落,，加入適量之新鮮培養(yǎng)基,，以吸管上下吸放數(shù)次以打散細(xì)胞團(tuán)塊，混和均勻后,，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
2 懸浮型細(xì)胞(suspension cell)
2.1 吸出細(xì)胞培養(yǎng)液,，放入離心管中,，離心1000 rpm 5 分鐘。
2.2 吸掉上清液,，加入適量之新鮮培養(yǎng)基,，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng),。
3 融合瘤(hybridoma)
3.1 有些hybridoma cell 需培養(yǎng)三天以上才會產(chǎn)生抗體，若是更換培養(yǎng)基,，則可能會失去抗體,。因此繼代培養(yǎng)不需離心后更換培養(yǎng)基，直接添加新鮮培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞濃度即可,。若體積太大,，可傾斜放置,，或分殖至新培養(yǎng)瓶中。