化工儀器網(wǎng)
資料下載
大鼠血清、血漿及相關液體樣本中視黃醇結合蛋白4（RBP-4）含量的檢測
閱讀：208 發(fā)布時間：2018-7-12實驗試劑
1. 大鼠視黃醇結合蛋白4(RBP-4)定量檢測試劑盒(ELISA)
2. 蒸餾水
實驗設備
1. 37℃恒溫箱
2. 標準規(guī)格酶標儀
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 一次性試管
5. 吸水紙
實驗步驟
1. 準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。
2. 配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3. 加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上,，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍),；空白對照孔不加。
4. 溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5. 洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。
6. 加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加,。
7. 溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8. 洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min,。
10. 終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12. 計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算,。終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
注意事項
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。
2. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融,。
3. 樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒,。
4. 實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
5. 酶標包被板開封后如未用完,，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
6. 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差。
7. 牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結果乘以5才是樣本實際濃度,。
8. 本試劑盒定量范圍為0.5-16μg/L，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.5-16μg/L范圍內(nèi)),，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本終濃度,。
9. 若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。
10. 為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜,。
11. 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。
12. 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。