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小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Bend.3培養(yǎng)說(shuō)明上海雅吉生物科技有限公司

培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說(shuō)明
一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介
1,、細(xì)胞名稱：Bend.3,；小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
2,、生長(zhǎng)特性： □ 貼壁□ 懸浮□半懸浮半貼壁
3、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
培養(yǎng)條件DMEM(高糖）+10%FBS+1%雙抗
溫度37℃
空氣條件5% CO2,，,95% AIR
傳代方法1:2 傳代，2~3 天換液
凍存條件90%FBS+10%DMSO
4,、背景資料：該細(xì)胞轉(zhuǎn)染了NTKmT 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,，表達(dá)多瘤病毒中T 抗原。
血管性血友病因子的分泌和吸收熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）證實(shí)了該細(xì)胞
株的內(nèi)皮細(xì)胞特性,。細(xì)胞因子和脂多糖（LPS）可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌MAdCAM-1 和E
選擇素,。TNF-α、IL-1 和LPS 的誘導(dǎo)是時(shí)間和濃度依賴,。早代數(shù)的未刺激細(xì)胞
會(huì)分泌MAdCAM-1 和VCAM-1,，但找過(guò)30 代不分泌。細(xì)胞會(huì)組成型分泌ICAM-1,，
并且表達(dá)量會(huì)在LPS,、IL-1 和TNF-α刺激下增多。P 選擇素在早代數(shù)和晚代數(shù)細(xì)
胞中受TNF-α誘導(dǎo)分泌,，但30 代后分泌量增加,。
小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Bend.3培養(yǎng)說(shuō)明二．使用方法
1、您收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出25cm2 培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO2
細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4 小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)
或進(jìn)行傳代,。
2,、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用
上海雅吉生物科技有限公司
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PBS 清洗細(xì)胞一次,；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待
細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后
將懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min,；
3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml *培養(yǎng)基重懸，然后按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳
代,，后放入37℃,，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3,、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用
PBS 清洗細(xì)胞一次,；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml 至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待
細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將
懸液轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，1000rpm 離心5min,；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜,，24h 后轉(zhuǎn)
入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。
4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃
水浴中解凍,，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml *培養(yǎng)基的15ml 離心管中,， 1000rpm
離心5min,；
3）棄上清，沉淀用5ml *培養(yǎng)基重懸,，接種25cm2 培養(yǎng)瓶,，于37℃，5%CO2
細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Bend.3培養(yǎng)說(shuō)明