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雞新城疫病毒（NDV）ELISA試劑盒說明書
閱讀：200 發(fā)布時間：2018-4-19雞新城疫病毒（NDV）ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中新城疫病毒（NDV）表達。
實驗原理
雞新城疫病毒（NDV）ELISA試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞新城疫病毒（NDV）表達,。用純化的雞新城疫病
毒（NDV）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，可與樣品中新城疫病毒（NDV）相結(jié)合,，經(jīng)
洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的新城疫病毒（NDV）抗體結(jié)合,，形成
抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下
轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD
值），與CUTOFF 值相比較,，從而判定標本中雞新城疫病毒（NDV）的存在與否,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 陽性對照0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 陰性對照0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔,、陽性對照2 孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié)：
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為新城疫病毒（NDV）陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為新城疫病毒（NDV）陽性
,。
雞新城疫病毒（NDV）ELISA試劑盒說明書注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M 的硫酸，使用時必須
注意安全,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月