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本試劑盒僅供研究使用。      

使用目的：

本試劑盒用于測定植物樣本中大豆球蛋白（Glycinin）的含量,。

實驗原理

本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中大豆球蛋白（Glycinin）水平,。用純化的大豆球蛋白（Glycinin）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入大豆球蛋白（Glycinin）,，和HRP標記的大豆球蛋白（Glycinin）抗原,，使它們競爭結(jié)合，,，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。樣本顏色的深淺和樣品中的大豆球蛋白（Glycinin）的含量呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大豆球蛋白（Glycinin）的含量,。  

試劑盒組成

 

標本要求 

1．標本處理：（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復凍融三次,，再經(jīng)玻璃纖維過濾后,，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻提取進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，備查

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

 

1. 加樣：分別設標準孔,、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準孔中加50微升,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

2. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    

   計算

     以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。

   注意事項

   1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。

   2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。

   3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

9. 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

10. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號組分不得混用,。

    檢測范圍：

    5 μg/ml -165 μg/ml

    規(guī)格：

    96人份/盒

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

    2．有效期：6個月