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本試劑盒僅供研究使用。   

使用目的：

本試劑盒用于測定樣本中乙酸(AA)的含量,。  

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中乙酸(AA)水平,。用純化的乙酸(AA)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中加入乙酸(AA),，和HRP標(biāo)記的乙酸(AA)抗原，使它們競爭結(jié)合,，,，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的乙酸(AA)的含量呈負(fù)相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中乙酸(AA)的含量,。  

試劑盒組成

 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本處理：（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，備查

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

 

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔,、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

8. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

    

   計(jì)算

     以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。

   注意事項(xiàng)

   1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

   2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。

   3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

9. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

10. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號組分不得混用,。

    檢測范圍：

    30 ng/L -1500ng/L

    規(guī)格：

    96人份/盒

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：,；2-8℃。

    2．有效期：6個(gè)月