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技術文章

人尿激酶(UK)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用流程方法,?,??

閱讀:168          發(fā)布時間:2024-7-24

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                     96T

0.05μg/ml-5μg/ml

 

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中尿激酶(UK)含量,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本尿激酶(UK)水平。用純化的尿激酶(UK)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入尿激酶(UK)再與HRP標記的尿激酶(UK)抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經過洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的尿激酶(UK)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品尿激酶(UK)濃度,。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(6.4μg/ml

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

3.2μg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

1.6μg/ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

0.8μg/ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

0.4μg/ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

0.2μg/ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

  1. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。

  2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

  3. 配液:將30倍(48T20倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍(48T20倍)稀釋后備用

  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。

  5. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外

  6. 溫育:操作同3,。

  7. 洗滌:操作同5,。

  8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.

  9. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。

  10. 測定:以空白孔調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

    操作程序總結:

     

     

    計算

      以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。

    注意事項

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。

    2濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果,。

    3.各步加樣均應使用加樣器,,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。

  11. 請每次測定的同時做標準曲線,,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  12. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

    9.本試劑不同批號組分不得混用,。

    保存條件及有效期

    1試劑盒保存:2-8,。

    2.有效期:6個月


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