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人尿激酶(UK)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用流程方法,?,??
閱讀:168 發(fā)布時間:2024-7-24本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
0.05μg/ml-5μg/ml
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中尿激酶(UK)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人尿激酶(UK)水平。用純化的人尿激酶(UK)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入尿激酶(UK),再與HRP標記的尿激酶(UK)抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的尿激酶(UK)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品中人尿激酶(UK)濃度,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品(6.4μg/ml) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
3.2μg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1.6μg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
0.8μg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
0.4μg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
0.2μg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍(48T的20倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍(48T的20倍)稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
溫育:操作同3,。
洗滌:操作同5,。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
測定:以空白孔調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
請每次測定的同時做標準曲線,,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃,。
2.有效期:6個月