化工儀器網
技術文章
牛弓形蟲抗體(Tox Ab)ELISA試劑盒使用操作步驟,？
閱讀：136 發(fā)布時間：2024-3-18本試劑盒僅供研究使用,。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿及相關液體樣本中弓形蟲抗體(Tox Ab)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中牛弓形蟲抗體(Tox Ab)表達,。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原，可與樣品中弓形蟲抗體(Tox Ab)相結合,，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中牛弓形蟲抗體(Tox Ab)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
溫育：操作同3,。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲抗體(Tox Ab)陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為弓形蟲抗體(Tox Ab)陽性。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個月