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黃曲霉毒素B1（AFB1）ELISA試劑盒使用操作,？
閱讀：321 發(fā)布時間：2023-11-22本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于檢測豆粉,，飼料和谷物,玉米及食品,，魚、蝦和肉類組織（如雞,、牛肉和豬肉）,，雞蛋、蜂蜜,、牛奶,、羊奶，血清和尿樣,，細胞中黃曲霉毒素B1（AFB1）含量,。
2 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔板包被有黃曲霉毒素B1（AFB1）偶聯(lián)抗原,，加入黃曲霉毒素B1（AFB1）標準品或樣品,，游離黃曲霉毒素B1（AFB1）與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉毒素B1（AFB1）偶聯(lián)抗原互相競爭抗黃曲霉毒素B1（AFB1）抗體酶標記物，用TMB底物顯色,，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中黃曲霉毒素B1（AFB1）含量成反比，通過標準曲線計算樣品中黃曲霉毒素B1（AFB1）的含量,。
3 試劑盒組成
3.1 預(yù)包被的AFB1偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）,。
3.2 AFB1標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml,，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml,。
3.3抗AFB1抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。
3.4顯色液A：1瓶（6ml）,。
3.5顯色液B：1瓶（6ml）,。
3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸,。
3.7樣本稀釋液：1瓶（10×, 6ml）,，用于樣品稀釋用。
3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×,，20ml）,，用于洗板。
3.9說明書一份,。
4 需要而未提供的材料
4.1 設(shè)備
4.1.1波長450nm酶標儀,。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒,。
4.1.4振蕩器,。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相當(dāng)?shù)臑V紙,。
4.1.7微量移液器,。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇,。
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃,，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒,。
6.3 試劑盒使用前,，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時,。
6.4 標準品中含有黃曲霉毒素B1（AFB1）,，使用時應(yīng)特別注意，操作時應(yīng)帶手套,。
6.5 終止液中含有硫酸,，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品,、樣品所用吸頭不能混用,，否則會影響試驗結(jié)果,。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品,、樣品所用吸頭不得混用,，否則會影響實驗結(jié)果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,，否則會影響實驗結(jié)果
6.9 混合試劑時應(yīng)避免起泡,。
7 工作液準備
7.1 AFB1標準品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應(yīng)終止液：已備用
8 樣品處理程序（樣品在提取過程中,，要嚴格按說明書操作,，提取過程中應(yīng)準確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準確,，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品,，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman No 1濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃）,，時間約2小時,。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條,，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分,，否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始,，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染,，每個標準品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預(yù)先進行編號,，標記B0、標準品和樣品的位置,，推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆）,，將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50µl 0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗AFB1抗體酶結(jié)合物
9.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘,。
9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,，可以減少雙孔誤差）
9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次,，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完除去孔中液體,。
9.4 反應(yīng)
9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,，再加 50µl顯色液B,；輕微晃動反應(yīng)板使之混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度,，結(jié)果在5min內(nèi)讀取,。
10 結(jié)果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%,，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0 ng/ml標準溶液的平均吸光度值
10.1.2以AFB1濃度的對數(shù)值為X軸,，百分吸光度值為Y軸,，繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,，可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標,，即為AFB1濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中AFB1濃度C（ng/ml）
10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,，因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù),。
10.2 半定量測定
10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較,，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值,。
10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較,，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值,。
11 特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
黃曲霉毒素B1 100%
黃曲霉毒素B2 80%
黃曲霉毒素G1 75%
黃曲霉毒素G2 30%
12 試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0. 05ng/ml
B0吸光度最佳值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％,。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％,。
13
試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml。
14 分析限制
本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證,。