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本試劑盒僅供研究使用,。   

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定相關(guān)液體樣本中1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）水平,。用純化的1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）,，和HRP標(biāo)記的1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）抗原,，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，,，經(jīng)洗滌后加底物TMB顯色,。樣本顏色的深淺和樣品中的1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）的含量,。  

試劑盒組成

 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本處理：（1）水樣   采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后,，備查

（2）組織   樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

 

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加50微升，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

7. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

    

   計(jì)算

     以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。

   注意事項(xiàng)

   1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

   2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

   3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

9. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

10. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

    6．底物請(qǐng)避光保存,。

    7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

    9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

    檢測(cè)范圍：

    2ng/L -100ng/L

    規(guī)格：

    96份/盒

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：2-8℃,。

    2．有效期：6個(gè)月