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人破傷風抗體(Tetanus Ab)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書
閱讀：150 發(fā)布時間：2023-5-26本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
1.2 IU/L - 40IU/L
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中破傷風抗體(Tetanus Ab)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人破傷風抗體(Tetanus Ab)水平。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，往包被單抗的微孔中依次加入破傷風抗體(Tetanus Ab)，再與HRP標記的抗原結合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的破傷風抗體(Tetanus Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人破傷風抗體(Tetanus Ab)濃度,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（72 IU/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
36 IU/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
18 IU/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
9 IU/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
4.5 IU/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.25 IU/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6個月