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技術(shù)文章

CCK8 檢測耐藥細(xì)胞株耐藥株 PC9R 吉非替尼藥物的耐藥作用

閱讀:466          發(fā)布時間:2022-10-27

 

CCK8 檢測耐藥細(xì)胞株耐藥株 PC9R 吉非替尼藥物的耐藥作用
細(xì)胞:PC9R、PC9
藥物:吉非替尼
儀器與試劑:CCK8 試劑 日本同仁,;
分光光度計 TECAN
實驗過程:
一:細(xì)胞培養(yǎng)
PC9R 和 PC9 均采用含 10%胎牛血清,1%雙抗(青鏈霉素混合液)的 DMEM 培養(yǎng)基,置于 37℃,,5% CO2 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。
二,、吉非替尼藥物貯藏液的配置
向已稱好樣本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀釋成 50mmol/L 的濃度,,使 用再稀釋弄所需的使用濃度。
三,、CCK8 試驗
1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的細(xì)胞懸液(2000–3000 cells/孔),。將培養(yǎng)板在培養(yǎng) 箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時 ( 在 37℃, 5% CO2 的條件下 ),。
2. 向培養(yǎng)板加入 10 ul 八個濃度(0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM)的待測藥物,。
3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育 24 小時。
4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡,,它們會影響 O.D 值 的讀數(shù),,斜著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基液面下加) ,。加入后輕輕振搖培養(yǎng)板,。
5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時。
6. 用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度,。

,、 IC50 結(jié)果計算

1、儀器導(dǎo)出原始數(shù)據(jù)

吸光度檢測

通道

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

檢測波長

A













450 nm

B


1.001

0.881

0.915

0.686

1.951

1.422

1.315

1.314

1.209

2.044



C


1.226

1.254

1.166

0.581

2.273

1.503

1.478

1.508

1.112

1.973


檢測日期

D


1.57

1.544

1.543

0.522

1.929

1.661

1.803

1.743

1.143

2.145


2019/8/1

E


1.691

1.787

1.717

0.487

0.239

1.943

1.858

1.796

0.93

0.232



F


1.811

1.769

1.838

0.399

0.234

1.941

1.859

1.896

0.857

0.244


檢測時間

G


2.094

1.838

1.905

0.525

0.25

2.077

1.903

1.963

0.851

0.232


16:07:31

H













加樣備注:

 


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

PCR






PC9R






B


12.5uM

12.5uM

12.5uM

25uM

0uM

12.5uM

12.5uM

12.5uM

25uM

0uM


C


6.25uM

6.25uM

6.25uM

25uM

0uM

6.25uM

6.25uM

6.25uM

25uM

0uM


D


3.125uM

3.125uM

3.125uM

25uM

0uM

3.125uM

3.125uM

3.125uM

25uM

0uM


E


1.5625uM

1.5625uM

1.5625uM

50uM

空白

1.5625uM

1.5625uM

1.5625uM

50uM

空白


F


0.78125uM

0.78125uM

0.78125uM

50uM

空白

0.78125uM

0.78125uM

0.78125uM

50uM

空白


G


0.390625uM

0.390625uM

0.390625uM

50uM

空白

0.390625uM

0.390625uM

0.390625uM

50uM

空白


H













 

2,、計算結(jié)果

親本株

(uM)

50

25

12.5

6.25

3.125

1.5625

0.78125

0.390625


抑制百分比

(%)

87.32965

80.36832

61.80479

46.16943

27.55064

17.64273

13.53591

5.819521

耐藥株

(uM)

50

25

12.5

6.25

3.125

1.5625

0.78125

0.390625


抑制百分比

(%)

64.61313

49.46828

38.70554

30.67473

17.51008

10.35937

8.544188

4.015402

 



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