化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
大豆β伴球蛋白Elisa試劑盒（競爭法）說明書
閱讀：276 發(fā)布時間：2022-10-10使用目的：
本試劑盒用于測定植物樣本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競爭法測定標(biāo)本中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)水平,。用純化的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中
加入大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)，和 HRP 標(biāo)記的大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)抗原,， 使它們競爭結(jié)合,，，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。樣本顏色的深淺和樣品中的大豆β-
伴球蛋白(β-conglycinin)的含量呈負(fù)相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大豆β-伴球蛋白(β-conglycinin)的含量,。
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本處理：（1）水樣采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次,，再經(jīng)玻璃纖維過濾后，備查（2）組織樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，備查
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔,、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色215 分鐘.
7. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
8. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
檢測范圍：
10 μg/ml -4800 μg/ml
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個月