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離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟

                                分光光度法 50管/24樣

注   意 ：正式測定前取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,，主要由原果膠,、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖,、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量豐富的多糖成分,，其*的物理,、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵,、氫鍵,、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）,。

測定原理：

利用帶有螯合劑的酸溶液提取離子結(jié)合型果膠（ISP）,，采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),，生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿,、80％乙醇、丙酮,、濃硫酸（不允許快遞）,、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體50mL× 1瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體50mL× 1瓶,，4℃保存。

試劑三：標(biāo)準(zhǔn)液1mL× 1支,，4℃保存,。

試劑四：液體5 mL× 1瓶，4℃保存,；

離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟樣品的前處理：

1,、 細(xì)胞壁的提取：取約0.3g樣本,，加入1mL 80％乙醇,，室溫快速勻漿，95℃水浴20min,，冷卻至室溫,，4000g 25℃離心10min，棄上清,。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右,，4000g 25℃離心10min，棄上清即可）,，沉淀即為粗細(xì)胞壁,，加入1mL試劑一（去除淀粉）浸泡15小時(shí)，4000g 25℃離心10min,，棄上清,，將沉淀干燥，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）,。

2,、 ISP的提取：稱取烘干的CWM 3mg,，加入1mL試劑二,，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬，可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿,，或者用勻漿器勻漿),。8000g 4℃離心10min，取上清液待測,。

測定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至530nm處,，蒸餾水調(diào)零,；試劑三和試劑四37℃預(yù)熱10min以上；

2、操作表：

 混勻  

混勻95℃水浴5min后,，530nm處讀取吸光值,，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管,、對照管和測定管吸光值分別記為A1,、A2、A3和A4,。若A大于2,，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋10倍或20倍）?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管,，每個測定管需設(shè)一個對照管。

ISP含量計(jì)算：

ISP含量(mg /g 干重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，0.05mg/mL,；V1：加入樣本體積，0.1mL,；V2：加入提取液體積,，1mL； W：樣本干重,，g,。

注意：

低檢測限為50μg /g 干重

離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒操作步驟