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質(zhì)粒菌株產(chǎn)品操作說明書
閱讀：1057 發(fā)布時間：2021-9-3一、擴增流程
收到產(chǎn)品后,，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標簽來判斷產(chǎn)品形式,，并在擴增前準確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度,。
1,、質(zhì)粒干粉（常溫運輸，存于-20度,，90天保質(zhì)期,，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒后使用）
①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒,；
②取1支100μl 感受態(tài)于冰上解凍10min,，加入2μl質(zhì)粒，再冰浴30min后,，42℃熱激60s,，不要攪動，再冰浴2min,；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
1,、質(zhì)粒干粉（常溫運輸，存于-20度,，90天保質(zhì)期,，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒后使用）
①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒,；
②取1支100μl 感受態(tài)于冰上解凍10min,，加入2μl質(zhì)粒，再冰浴30min后,，42℃熱激60s,，不要攪動，再冰浴2min,；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基,，180rpm震蕩37℃培養(yǎng)45min；
④6000rpm離心5min,，僅留100μl上清液重懸細菌沉淀,，并涂布至目標質(zhì)粒抗性的LB平板上；（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布,，可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化子）
⑤將平板正向培養(yǎng)1h,，再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h,；
（菌落過多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化,。沒有菌落則加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另外不要直接轉(zhuǎn)表達感受態(tài),，要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài),，重提質(zhì)粒后再導(dǎo)入表達感受態(tài)）
（菌落過多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化,。沒有菌落則加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另外不要直接轉(zhuǎn)表達感受態(tài),，要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài),，重提質(zhì)粒后再導(dǎo)入表達感受態(tài)）
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對應(yīng)抗生素,，220rpm震蕩培養(yǎng)14h,，根據(jù)實驗需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。
2,、甘油菌種（冰袋運輸,，存于-80℃，保質(zhì)期90天,，請務(wù)必劃線挑單克隆培養(yǎng)）
四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng),，酵母菌需要先液體復(fù)蘇再四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng),。
3,、穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃,，保質(zhì)期7天）
穿刺接種,，液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng),。
4,、菌落平板（冰袋運輸，存于4℃,，保質(zhì)期7天）
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中,。
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中,。
5、液體質(zhì)粒（冰袋運輸,，存于-20℃,，保質(zhì)期90天）
單獨提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6,、濾紙質(zhì)粒（常溫運輸,，存于-20度，保質(zhì)期90天,，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒后使用）
單獨提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6,、濾紙質(zhì)粒（常溫運輸,，存于-20度，保質(zhì)期90天,，請務(wù)必先轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒后使用）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中,，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min,，吸取5ul質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，離心全涂,。
7,、常用抗生素推薦濃度：點擊查看
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二、轉(zhuǎn)化圖片
