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技術(shù)文章

人真皮成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)制備方式

閱讀:285          發(fā)布時(shí)間:2021-6-17

真皮成纖維細(xì)胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞,。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織,真皮成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞,,由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng),,它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。

       一般而言,,成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì),,并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時(shí),真皮成纖維細(xì)胞由可增殖,,可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的,,可重塑基質(zhì)的表型,同時(shí),,它們會(huì)分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對(duì)修復(fù)時(shí)的炎癥反應(yīng),。

       以下是提供的一種人真皮成纖維細(xì)胞的制備方式(僅供參考):
       1.首先在分離真皮成纖維細(xì)胞時(shí)要做到在無菌條件下進(jìn)行,打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理,。
       2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精,,消毒2min,
       3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍,,
       4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等,,
       5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊,放入dish中,,加0.1%的dispase溶液,,封口膜封口,4℃冰箱過夜消化,,
       6.第二天,,用鑷子將表皮與真皮分開(薄的那層是表皮,厚的那層是真皮),,
       7.將真皮剪碎,,移至離心管,用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定),,
       8.用100 μm網(wǎng)篩過濾,,
       9.取濾液,300 g,,離心5 min,,
       10.用*培養(yǎng)基重懸沉淀,
       11.鋪瓶,,
       12.隔天換液,。
       以上是皮膚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)的一種方式,不同的技術(shù)人員分離培養(yǎng)的方法也不同,,使用的試劑比例也不盡相同,,皮膚成纖維細(xì)胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達(dá)檢測(cè),采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù),。細(xì)胞純度可高達(dá)于90%,,所有的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

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