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HCCLM3高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)說明書
閱讀：714 發(fā)布時(shí)間：2021-6-16HCCLM3高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)說明書
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
產(chǎn)品名稱 | HCCLM3高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | ||
生長特性 | 貼壁生長 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫無血清凍存液 |
培養(yǎng)體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) | ||
二,、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法,。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝,，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí),。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基,，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過80%匯合度時(shí),，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）
三,、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1,、對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后,，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng),，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）,。
HCCLM3高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)說明書
3）細(xì)胞凍存：
1,、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；
3,、用適量的凍存液重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；
4,、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃。
四,、售后服務(wù)告知書
1）細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),；
2. 細(xì)胞污染問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，核實(shí)后重發(fā)；
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā)；
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；
5. 細(xì)胞活性問題,，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā),；
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā)。
二）細(xì)胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些,？
1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā),；
2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；
3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā),；
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,，不重發(fā)；
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),，未告知,，不重發(fā)；
7. 視具體情況而定,。
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