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人支氣管上皮細(xì)胞16HBE培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
閱讀：1028 發(fā)布時(shí)間：2021-6-11人支氣管上皮細(xì)胞16HBE培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
一、細(xì)胞培養(yǎng)條件
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人支氣管上皮細(xì)胞16HBE | ||
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | 凍存條件 | 細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液 |
培養(yǎng)體系 | KM培養(yǎng)基 | ||
傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
備注 | 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)及時(shí)更換培養(yǎng)基,。消化時(shí)間較長(zhǎng)，需放在培養(yǎng)箱中消化,，每2分鐘進(jìn)行觀察一次,；消化后需用含有10%的*培養(yǎng)基終止消化并離心收集。傳代需要使用新的培養(yǎng)器皿 | ||
二,、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法,。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝,，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí),。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí),，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml*培養(yǎng)基,，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí),，根據(jù)情況傳代或者凍存,，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話(huà)，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1,、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，*脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
PS：若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞,，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%,，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存,。若密度超過(guò)80%,，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
人支氣管上皮細(xì)胞16HBE培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
3）細(xì)胞凍存：
1,、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；2,、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中,；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃,。
四、售后服務(wù)告知書(shū)
1）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,，細(xì)胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),；
2. 細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，核實(shí)后重發(fā)；
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā),；
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；
5. 細(xì)胞活性問(wèn)題,，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，核實(shí)后予重發(fā),；
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，3天未告知的,，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的,，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā),。
二）細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？
1. 客戶(hù)造成細(xì)胞污染,，不重發(fā),；
2. 客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；
3. 非本庫(kù)推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā)；
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；
7. 視具體情況而定。
人支氣管上皮細(xì)胞16HBE培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)