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申克孢子細(xì)菌探針法熒光定量PCR試劑盒
閱讀：303 發(fā)布時(shí)間：2021-5-24 申克孢子細(xì)菌探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn) ：
本產(chǎn)品是根據(jù)探針法qPCR原理開發(fā)檢測申克孢子細(xì)菌的產(chǎn)品,，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品DNA 模板,。
2. 根據(jù)申克孢子細(xì)菌設(shè)計(jì)引物和探針,，能專一性地檢測出申克孢子細(xì)菌,，但不 能檢測其他非申克孢子細(xì)菌,。
3. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 一管式閉管操作,，降低了交叉污染,。
5. 本產(chǎn)品只能用于科研。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次體系的熒光定量 PCR,。
運(yùn)輸及保存 自備試劑使用方法低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年。
運(yùn)輸及保存 自備試劑使用方法低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年。
使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí),，由于其濃度較高,，一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作,。DNA 模板一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7,，6,，5，4,，3,，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭,，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
申克孢子細(xì)菌探針法熒光定量PCR試劑盒二,、樣品DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有N 個樣品,，則需要進(jìn)行N+2 個樣品提取,，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管,。三,、設(shè)置qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做1 次重復(fù),，則標(biāo)記N+9 個PCR 管,，其中N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品,，1 個用于PCR 陰性對照（用水做模板）,，6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,，并且只做1 次重復(fù),，則標(biāo)記N+4 個PCR管，其中N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品,，1 個用于PCR 陰性對照（用水做模板）,，1 個用于PCR 陽性對照（用第4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟,。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)）：
四,、qPCR 反應(yīng)參數(shù)
過程溫度時(shí)間預(yù)變性95℃5 minPCR 反應(yīng)（40 個循環(huán)）95℃15sec60℃1 min（采集 FAM 通道的熒光信號）
五、數(shù)據(jù)處理11. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log 值為橫軸,，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的log 值,，再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照Ct 必須大于或等于35。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,，如果其Ct 大于或等于35 則為陰性,，如果小于或等于30 則為陽性。如果在30-35 之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct 值如果大于或等于35 則為陰性，如果小于35，則為陽性,。
申克孢子細(xì)菌探針法熒光定量PCR試劑盒
四,、qPCR 反應(yīng)參數(shù)
過程溫度時(shí)間預(yù)變性95℃5 minPCR 反應(yīng)（40 個循環(huán)）95℃15sec60℃1 min（采集 FAM 通道的熒光信號）
五、數(shù)據(jù)處理11. 如果把本試劑盒用于定量檢測,，則以陽性對照濃度的log 值為橫軸,，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再以待測樣品的Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的log 值,，再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測,，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照Ct 必須大于或等于35。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,，如果其Ct 大于或等于35 則為陰性,，如果小于或等于30 則為陽性。如果在30-35 之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct 值如果大于或等于35 則為陰性，如果小于35，則為陽性,。
申克孢子細(xì)菌探針法熒光定量PCR試劑盒