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Western Blotting 問題解答
閱讀：301 發(fā)布時間：2021-3-101、膠片上存在反轉(zhuǎn)印象（如：亮的條帶,、黑的背景）,？
原因：HRP的濃度過高；
解決：稀釋HRP至少10倍,。
2,、膜上有黃色或棕色的沉積？
原因：HRP的濃度過高,；
解決：稀釋HRP至少10倍,。
3、在暗室中條帶過于明亮,？
原因：HRP的濃度過高,；
解決：稀釋HRP至少10倍。
4,、條帶的發(fā)光時間持續(xù)了至少8小時,？
原因：HRP的濃度過高,；
解決：稀釋HRP至少10倍,。
5、信號太弱或沒有,？
原因：
1.太多的HRP積聚導致信號快速的消退,；
2.抗原或抗體的濃度不夠；
3.轉(zhuǎn)印不成功,；
4.HRP或其他底物的效價降低,。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.增加其濃度,；
3.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件,；
4.選擇其他的合適底物,。
6、背景高？
原因：
1.HRP濃度過高,；
2.封閉無效；
3.不適合的封閉試劑,；
4.洗滌不充分和洗滌液的量,；
5.膠片曝光過度,；
6.抗原或抗體的濃度太高。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍,；
2.尋找合適的封閉方法,；
3.選用其他的封閉試劑；
4.增加洗滌的時間,次數(shù),；
5.減少曝光時間,；
6.稀釋抗原或抗體。
7,、蛋白質(zhì)條帶上有空泡影像,？
原因：
1.蛋白質(zhì)沒有被充分轉(zhuǎn)印,；
2.膜沒有預先浸濕,；
3.在膠片和膜之間有氣泡。
解決：
1.尋找合適的轉(zhuǎn)移方法和條件,；
2.在轉(zhuǎn)印前充分浸濕,；
3.在暴光之前趕走氣泡。
8,、膠片上背景彌散,？
原因：HRP標記的抗體出現(xiàn)了積聚；
解決：稀釋HRP至少10倍,。
9,、無特異性條帶？
原因：
1.HRP濃度過高,；
2.SDS促使非特異蛋白質(zhì)條帶黏附在目的蛋白質(zhì)條帶上,。
解決：
1.稀釋HRP至少10倍；
2.在操作過程中不要加SDS,。