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植物吲哚乙酸（IAAAB）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                          96T

3 μg/L -110μg/L

 

使用目的：

本試劑盒用于測定植物組織,，細胞及其它相關(guān)樣本中吲哚乙酸（IAAAB）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中植物吲哚乙酸（IAAAB）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原,，往包被的微孔中依次加入吲哚乙酸（IAAAB）,，再與HRP標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的吲哚乙酸（IAAAB）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中植物吲哚乙酸（IAAAB）濃度。

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（200μg/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

100μg/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
25μg/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5μg/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
6.25μg/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

操作程序總結(jié)：

 

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

• 請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 植物吲哚乙酸（IAAAB）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                          96T
3 μg/L -110μg/L

使用目的：
本試劑盒用于測定植物組織,，細胞及其它相關(guān)樣本中吲哚乙酸（IAAAB）含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中植物吲哚乙酸（IAAAB）水平。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原,，往包被的微孔中依次加入吲哚乙酸（IAAAB），再與HRP標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的吲哚乙酸（IAAAB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中植物吲哚乙酸（IAAAB）濃度,。
試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（200μg/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

100μg/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
25μg/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5μg/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
6.25μg/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

操作程序總結(jié)：


計算
  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6個月