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免疫印跡技術(shù) (Western blotting, WB) 是蛋白定性和定量的金標(biāo)準(zhǔn)，因此廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究,。由于Western blot檢測包含多個步驟,，樣品制備、上樣或轉(zhuǎn)膜等實驗過程中任何細(xì)微的差異,，都可能導(dǎo)致實驗結(jié)論的不一致性,，甚至*相悖。為了避免實驗操作差異引起誤差,，在任何WB檢測實驗中,，都需要設(shè)定合適的內(nèi)參。

      WB常見的應(yīng)用是研究生物樣品中蛋白質(zhì)豐度的變化,。內(nèi)參的信號通常用來對目的蛋白的信號進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,，需要強(qiáng)調(diào)的是內(nèi)參抗體應(yīng)該與實驗抗體在相同的印跡上進(jìn)行。因此選擇的內(nèi)參蛋白必須是實驗樣本中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白,，一般會選擇組成型表達(dá)且是細(xì)胞基本功能必需的管家蛋白如細(xì)胞骨架蛋白作為內(nèi)參,。但是進(jìn)一步的研究表明,，管家蛋白的表達(dá)并不恒定，會因?qū)嶒灄l件的改變而改變,。

選擇內(nèi)參應(yīng)遵循以下原則

表達(dá)水平：內(nèi)參蛋白應(yīng)在實驗樣本中高表達(dá),；

豐度相似性：實驗樣本中內(nèi)參蛋白的表達(dá)豐度應(yīng)與目的蛋白的豐度有相似性，實驗方案和檢測方法可以揭示內(nèi)參蛋白和目標(biāo)蛋白水平的變化,，而不會出現(xiàn)信號飽和,；（如果內(nèi)參蛋白的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目的蛋白，必須對內(nèi)參蛋白進(jìn)行梯度稀釋以確定內(nèi)參蛋白的檢測范圍）,。

  內(nèi)參蛋白有多種多樣的選擇,，隨機(jī)選擇beta-Actin或alpha-Tubulin作為內(nèi)參并不能滿足所有的WB實驗，對于不同特性的WB,，尋找合適的內(nèi)參是特定WB成功的關(guān)鍵,。我們在這里列出了內(nèi)參選擇需要遵循的原則以便大家更好的選擇合適的內(nèi)參。
 

選擇內(nèi)參應(yīng)遵循以下原則

穩(wěn)定表達(dá)：在特定實驗條件下（如特殊的實驗處理或不同的發(fā)育階段）,，內(nèi)參蛋白的水平相對于總蛋白保持恒定,；

表達(dá)水平：內(nèi)參蛋白應(yīng)在實驗樣本中高表達(dá)；

豐度相似性：實驗樣本中內(nèi)參蛋白的表達(dá)豐度應(yīng)與目的蛋白的豐度有相似性,，實驗方案和檢測方法可以揭示內(nèi)參蛋白和目標(biāo)蛋白水平的變化,，而不會出現(xiàn)信號飽和；（如果內(nèi)參蛋白的表達(dá)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目的蛋白,，必須對內(nèi)參蛋白進(jìn)行梯度稀釋以確定內(nèi)參蛋白的檢測范圍）,。