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技術(shù)文章

RCA滾環(huán)擴增試劑盒說明書

閱讀:524          發(fā)布時間:2020-12-24

RCA滾環(huán)擴增試劑盒說明書

滾環(huán)擴增(rolling circle amplification,,RCA)是近幾年發(fā)展起來的種核酸恒溫擴增方法,。以環(huán)狀DNA為模板,,通過個短的DNA引物(與部分環(huán)狀模板互補),,在phi29 DNA 聚合酶催化下將dNTPs轉(zhuǎn)變成單鏈DNA,此單鏈DNA包含成百上千個重復(fù)的模板互補片段,。這種方法不僅可以直接擴增DNA和RNA,,還可以實現(xiàn)對靶核酸的信號放大,,靈敏度達(dá)到個拷貝的核酸分子,因此在核酸檢測中具有很大的應(yīng)用價值和潛力,。 因其高靈敏度,、高特異性和可操作性,,RCA技術(shù)在基礎(chǔ)研究,、實際檢測,、醫(yī)療診斷及納米材料等方面都有很好的應(yīng)用,結(jié)合細(xì)胞原位檢測、單核苷酸多態(tài)性SNPs,,蛋白質(zhì)分析,、免疫芯片和全基因組的擴增等研究都能發(fā)揮其巨大的優(yōu)勢。
RCA滾環(huán)擴增試劑盒說明書滾環(huán)擴增試劑盒配備的phi29 DNA聚合酶具有鏈置換和連續(xù)合成特性,,可連續(xù)合成長達(dá)70kb的DNA,。另外,該酶具有3’→5’外切酶校讀功能,,合成的DNA保性高,。試劑盒配備的Random Hexamers為6堿基隨機引物可對目標(biāo)分子進(jìn)行指數(shù)放大(通常放大10000倍)。
滾環(huán)擴增

主要特征

  • 高靈敏度:單引物RCA的擴增效率成指數(shù)擴大,,可達(dá)104-105,。
  • 操作簡單:恒溫擴增,程序簡單化,。
  • 儀器簡單:只需維持恒溫的水浴鍋,。
  • 應(yīng)用廣泛:可廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和醫(yī)療診斷等域。

RCA滾環(huán)擴增試劑盒說明書組分

名稱100T
phi29 DNA Polymerase (20 U/μl)50 μl
10×phi29 Buffer1 ml
Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)25 μl
10mM dNTP Mixture200 μl
25XRandom Hexamer100 μl

儲存

-20℃可保存3年,,避免反復(fù)凍融,。

RCA滾環(huán)擴增試劑盒說明書實例

1. 應(yīng)用本試劑盒以pEasy質(zhì)粒為模板, 30℃作用5h,。泳道1-5是模板濃度分別為0.0004,,0.004, 0.04,,0.4,,1 ng/μl ,泳道6-10分別為泳道1-5相對應(yīng)的RCA產(chǎn)物用PstI酶切后的產(chǎn)物,,M 為D10000 DNA Marker,。

RCA滾環(huán)擴增試劑盒

2. 應(yīng)用本試劑盒以人基因組為模板, 30℃作用5h,。泳道1-6是模板濃度分別為 0.0004,,0.002,0.004,,0.04,,0.4,1 ng/μl ,,M 為D10000 DNA Marker,。

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