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分子生物學(xué)是在生物化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,，以研究核酸和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),、功能等生命本質(zhì)的學(xué)科，在核酸、蛋白質(zhì)分子水平研究發(fā)病,、診斷,、治療和預(yù)后的機(jī)制。其中基因工程（基因技術(shù),，基因重組）是目前分子生物學(xué)研究熱點(diǎn),，這些技術(shù)可以改造或擴(kuò)增基因和基因產(chǎn)物，使微量的研究對象達(dá)到分析水平,，是研究基因調(diào)控和表達(dá)的方法,，也是分子水平研究疾病發(fā)生機(jī)制、基因診斷和基因治療的方法,。轉(zhuǎn)化（transformation）,、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo),、轉(zhuǎn)位等是自然界基因重組存在的方式,，也是人工基因重組常采用的手段?；蛑亟M的目的之一是基因克隆（gene clone）,，基因克隆可理解為以一分子基因?yàn)槟０鍞U(kuò)增得到的與模板分子結(jié)構(gòu)*相同的基因,。使需要分析研究的微量、混雜的目的基因易于純化,，得以增量,，便于分析。
外來基因引起細(xì)胞生物性狀改變的過程叫轉(zhuǎn)化（transformation）,，以噬菌體把外源基因?qū)爰?xì)菌的過程叫轉(zhuǎn)染（transfection）,。利用載體（噬菌體或病毒）把遺傳物質(zhì)從一種宿主傳給另一種宿主的過程叫轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）。一個(gè)或一組基因從一處轉(zhuǎn)移到基因組另一處的過程叫轉(zhuǎn)位（transposition）,，這些游動(dòng)的基因叫轉(zhuǎn)位子,。

一、基因工程的常用工具

（一）載體
載體（Vector）是把外源DNA（目的基因）導(dǎo)入宿主細(xì)胞,，使之傳代,、擴(kuò)增、表達(dá)的工具,。載體有質(zhì)粒（plasmid）,、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質(zhì)粒（粘粒）,、病毒等,。載體具有能自我復(fù)制；有可選擇的，便于篩選,、鑒定的遺傳標(biāo)記,；有供外源DNA插入的位點(diǎn)；本身體積小等特征,。
質(zhì)粒存在于多種細(xì)菌,，是染色體（核）以外的獨(dú)立遺傳因子，由雙鏈環(huán)狀DNA組成,，幾乎*裸露,，很少有蛋白質(zhì)結(jié)合。質(zhì)粒有嚴(yán)緊型和松弛型之分,。嚴(yán)緊型由DNA多聚酶Ⅲ復(fù)制,，一個(gè)細(xì)胞可復(fù)制1-5個(gè)質(zhì)粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ復(fù)制,，一個(gè)細(xì)胞可復(fù)制30-50個(gè)質(zhì)粒,，如果用氯霉素可阻止蛋白質(zhì)合成，使質(zhì)粒有效利用原料,，復(fù)制更多的質(zhì)粒,。質(zhì)粒經(jīng)過改造品種繁多，常用的有pBR322,、pUC系列等,。這些質(zhì)粒都含有多個(gè)基本基因，如復(fù)制起動(dòng)區(qū)（復(fù)制原點(diǎn)Ori）,，便于復(fù)制擴(kuò)增,；抗抗生素標(biāo)記（抗氨芐青霉素Apr、抗四環(huán)素Tcr等）或大腸埃希菌部分乳糖操縱子（E.coli LacZ）等,，便于基因重組體的篩選,；基因發(fā)動(dòng)子（乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱子Trp等）和轉(zhuǎn)錄終止序列,，便于插入的外源基因轉(zhuǎn)錄,、翻譯表達(dá)。質(zhì)粒上還有許多限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn),，即基因插入位點(diǎn),，又叫基因重組位點(diǎn)，基因克隆位點(diǎn),。
常用噬菌體載體有單鏈?zhǔn)删wM13系統(tǒng),；雙鏈?zhǔn)删w系統(tǒng)。噬菌體應(yīng)和相應(yīng)的宿主細(xì)胞配合使用,。以上載體各有特點(diǎn),，便于選擇,，靈活應(yīng)用。

（二）工具酶
工具酶是基因重組技術(shù)*的工具,。主要有限制性內(nèi)切酶,、連接酶、核酸聚合酶,、逆轉(zhuǎn)錄酶,、核酸酶等。
限制性內(nèi)切酶有Ⅰ型和Ⅱ型限制性DNA內(nèi)切酶之分,，Ⅱ型能嚴(yán)格識(shí)別核酸序列,，并在識(shí)別區(qū)內(nèi)特定的核苷酸處切開DNA雙鏈。故通常所指都是Ⅱ型限制性DNA內(nèi)切酶,。識(shí)別分四核苷酸和六核苷酸,，其序列旋轉(zhuǎn)對稱。切口分開端和粘端,，產(chǎn)生3′－OH和5′－P末端,。內(nèi)切酶品種多，使用時(shí)應(yīng)注意溫度,、緩沖液用量（一般1μg DNA/2-5單位酶）等反應(yīng)條件,。