日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒說明書

 微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定，確保蛋白濃度在 1～

10mg/ml 范圍內(nèi),。

測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算,。此外,，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分

析。

測定原理：

強堿性溶液中,，雙縮脲與 CuSO4 形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成

正比,，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān),，故可用來測定蛋白質(zhì)含量,。該方法測定范圍為

1~10mg 蛋白質(zhì),，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品,，尤其是動物材料。

自備儀器和用品：

離心機,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶,，5 mg/mL,，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定,。

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g

組織,，加入 1mL 提取液（自備,，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））

冰浴勻漿,，8000g，4℃離心 10min,，取上清，即待測液,。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建

議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒,，間隔 7

秒,，總時間 3min）,；然后 8000g，4℃,，離心 10min,，取上清置于冰上待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 540 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取 0.5mL EP 管，加入 40μL 蒸餾水,，200μL 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min，

取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540nm 比色,，記為 A 空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 0.5mL EP 管,，加入 40μL 標(biāo)準(zhǔn)液，200μL 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min,，

取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，540 nm 比色,，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管,。

4. 測定管：取 0.5mL EP 管，加入 40μL 待測液,，200μL 試劑一,，混勻后室溫靜置 15 min，

取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板,，540nm 比色,，記為 A 測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次,。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式：

C 待測（mg/mL）= C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)

 =5×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)

注意事項：

1.樣品蛋白濃度須在 1～10mg/ml 范圍內(nèi),，低于 1mg/ml 不能用此法，高于 10mg/ml 須做相

應(yīng)稀釋,。因此測定前用 1～2 個樣做預(yù)實驗,，確保蛋白濃度在 1～10mg/ml 范圍內(nèi)。

2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水,、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取,。該法受硫酸銨、Tris 緩

沖液干擾,，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì),；否則改用 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。