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貨號:                                                   規(guī)格：50管/48樣

總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測定試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

    試劑一：異丙醇50mL（自備）。

TC 工作液：液體50mL×1 瓶,，4℃保存。

TC 標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1 支,，5μmol/mL,，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯,。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和,。利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC,；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC 氧化,，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物,；在500nm 有特征吸收峰,，其顏色深淺與TC 含量成正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、可調(diào)式移液槍,、1mL 玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水,。

操作步驟:

一,、TC的提取：

1,、 組織中TC的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,，8000g 4℃離心10min，取上清,，即TC待測液,。

2、 細(xì)胞,、細(xì)菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清,，加1mL試劑一,，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s,，停1s）,，8000g 4℃離心10min，取上清,，即TC 待測液,。

3、 血清（漿）等樣品：直接測定,。

二,、測定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. TC 工作液置于37℃水浴30min。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 標(biāo)準(zhǔn)品和980μLTC 工作液,，迅速混勻,，5min 后于500nm 處比色，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：在1mL 玻璃比色皿中依次加入20 μL TC 待測液和980μLTC 工作液,，迅速混勻,，5min 后于500nm 處比色，記為A 測定管,。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次,。血鈣濃度計(jì)算：

三、計(jì)算公式：

1. 血清（漿）中TC 含量：

TC（μ mol /dL）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×100 mL

= 500×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管

C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL,；100 mL：1dL=100 mL,。

2. 組織中TC 含量：

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TC（μ mol/mg prot）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

= 5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

TC（μ mol / g）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W

= 5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL；樣本蛋白濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g/mL

3. 細(xì)胞,、細(xì)菌中TC 含量：

TC（μ mol /10⁴ cell）= C 標(biāo)準(zhǔn)液×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（10⁴ cell /L）

= 5×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷細(xì)菌或細(xì)胞（10⁴ cell /L）

C 標(biāo)準(zhǔn)液：5μmol/mL,。

注意事項(xiàng)：

。低檢出限為1mmol/L,。