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游離脂肪酸含量測試盒
閱讀：256 發(fā)布時間：2020-11-12
游離脂肪酸（free fatty acid,，F(xiàn)FA）含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。
測定意義：
FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物,，又是脂肪合成的底物,。FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝,、內(nèi)分泌
功能有關(guān),，也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。
測定原理：
在弱酸性條件下,，F(xiàn)FA 與銅鹽反應(yīng)生成銅皂,，在 715nm 處有特征吸收峰,，在一定范圍內(nèi)游
離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系,。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機(jī),、震蕩儀,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板,。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶,，4℃保存,。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存,。
試劑三：液體×1 瓶,，4℃保存。
樣品中 FFA 提?。?/span>
1,、 血液：將所取血液，室溫靜置 1 h 后,，于 4 ℃ 離心機(jī) 3500 rpm 離心 15min,，取上清 0.1mL，
加 1mL 試劑一,，震蕩提取 3h,，8000g，4℃離心 10min,，取上清液待測,。
2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后,，用吸水紙吸取表面水分,，搗碎后稱取約 0.1g 轉(zhuǎn)移至離
心管，按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例加入試劑一,，震蕩提取 3h,，
8000g，4℃離心 10min,，取上清液待測,。
3、 細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建
議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲
2 秒,，間隔 3 秒,，總時間 3min）；震蕩提取 3h,，然后 8000g,，4℃，離心 10min,，取上清
待測,。
測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 715 nm。
2. 空白管：取上清液 0.4mL,，加 0.2mL 試劑二,，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min,，取上層
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板,，調(diào)零。
3. 測定管：取上清液 0.4mL,，加 0.2mL 試劑三,，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min,，取上層
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板,，測定吸光值，記為 A,。
FFA 含量計算：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055,，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量計算
FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA 含量計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
FFA（nmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)=133×(A-0.0055)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計算
FFA（nmol/104
cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=133×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量
V 樣總：上清液總體積，1 mL,；V 反總：反應(yīng)總體積,，0.4mL；V 樣：加入樣本體積,，0.4mL,；
W：樣本鮮重，g,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL
b.使用 96 孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0038 x+ 0.0055，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量計算
FFA（nmol/mL）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷V 樣= 2666×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA 含量計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（nmol /mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣×Cpr)
= 266×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
FFA（nmol /g）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
= 266×(A-0.0055)÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計算
FFA（nmol /104
cell）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=266×(A-0.0055)÷細(xì)胞數(shù)量
V 樣總：上清液總體積,，1 mL,；V 反總：反應(yīng)總體積，0.4mL,；V 樣：加入樣本體積,，0.4mL；
W：樣本鮮重,，g,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項：
1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定,，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公
司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒,。
2. di檢出限為 0.8 mmol/L。