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組織及血液酸性磷酸酶（ACP）測試盒
閱讀：438 發(fā)布時間：2020-11-11組織及血液酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,。
測定意義：
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸,，常見于巨噬細胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于
前列腺癌的輔助診斷,。
測定原理：
在酸性環(huán)境中,，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替和鐵青化鉀反應生
成紅色亞醌衍生物,，在510nm有特征光吸收,；通過測定510nm吸光度增加速率，來計算ACP活性,。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板、臺式離心機,、水浴鍋,、可調式移液器
和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶,，4℃保存,。
試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存,。
試劑三：液體×1 瓶,，4℃避光保存。
試劑四：液體×1 瓶,，4℃避光保存,，變成藍綠色不能使用,。
標準品：液體×1 支,，2μmol/mL 酚標準液，4℃保存,。
粗酶液提?。?br />1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加
入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,，4℃,、8000g 離心10min，取上清液待測,。
2. 血液可直接測定,，或者適當稀釋后測定。
測定：
1.分光光度計/酶標儀預熱30min,，調節(jié)波長到510nm ,蒸餾水調零,。
2. 試劑二置于37℃水浴中預熱30min,。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水,，40μL試劑二,，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min,；加入試劑四120μL,，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管,。
4. 標準管：取EP管,，加入4μL標準品，40μL試劑二,，40μL試劑三,，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min；加入試劑四120μL,，混勻后于510nm 測定吸光度,，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管,，加入40μL試劑二,，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min,；加入
試劑四120μL,，混勻；后加入4μL上清液,，混勻后于510nm測定吸光度,，記為A對照管。
6. 測定管：取EP管,，加入4μL上清液,，40μL試劑二，40μL試劑三,，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min,；加入試劑四120μL，混勻后于510nm 測定吸光度,，記為A測定管,。
注意：空白管和標準管只需做一次。
ACP 活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1. 血液中ACP活性計算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位,。
ACP活力(μmol/min/mL)= [C 標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總] ÷V樣
×V 樣總÷T= 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)
2. 組織中ACP活性計算
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位,。
ACP(μmol/min/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總]
÷(Cpr×V 樣)÷T=6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位。
ACP (μmol/min/g)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總]÷(W×
V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷W
C 標準品：2μmol/mL,；V 反總：反應體系總體積（mL）,，205μL=0.205 mL,；Cpr：上清液蛋
白質濃度，mg/mL,；W ：樣品質量,； V 樣：加入反應體系中上清液體積（mL），0.005mL,；V 樣
總：提取液體積,，1 mL；T：反應時間（min）,，15 min,。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
1. 血液中ACP活性計算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)= [C 標準品×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V反總] ÷V樣
×V 樣總÷T= 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)
2. 組織中ACP活性計算
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 酚定義為1個酶活單位,。
ACP(μmol/min/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總]
÷(Cpr×V 樣)÷T=6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個酶活單位,。
ACP (μmol/min/g)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 反總]÷(W×
V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷W
C 標準品：2μmol/mL；V 反總：反應體系總體積（mL）,，205μL=0.205 mL,；Cpr：上清液蛋
白質濃度，mg/mL,；W ：樣品質量,； V 樣：加入反應體系中上清液體積（mL），0.005mL,；V 樣
總：提取液體積,，1 mL；T：反應時間（min）,，15 min,。
注意事項：
1、試劑二,、試劑三和試劑四均需避光保存,。
2、試劑四變藍綠色后不能再使用,。
3,、加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不*,。
4、ACP不穩(wěn)定,，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快,，因此酸性磷酸酶樣品一般需當天
準備；血清樣品中,，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉,，使pH降至6.5
以下,，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周,。