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血清總鐵結(jié)合能力測試盒
閱讀:295 發(fā)布時間:2020-11-10測定意義:
血清總鐵結(jié)合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵的能力,,其含量高低與缺鐵性貧血,、急性肝炎等 疾病的發(fā)生密切相關(guān)。
測定原理:
Fe2+與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物,,在 562nm 處有特征吸收峰,。堿性條件下,血清轉(zhuǎn)鐵蛋 白可以與 Fe3+結(jié)合,,剩余未結(jié)合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+,,此時吸光度 A1 與未結(jié)合 Fe3+數(shù) 量正相關(guān);酸化后,,轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的 Fe3+釋放,,并且進一步被還原成 Fe2+ ,此時吸光度 A2 與總 Fe3+數(shù)量正相關(guān),。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比,。
血清總鐵結(jié)合力(Total Iron Binding Capacity,TIBC)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,。
測定意義:
血清總鐵結(jié)合能力指血清轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵的能力,,其含量高低與缺鐵性貧血、急性肝炎等
疾病的發(fā)生密切相關(guān),。
測定原理:
Fe2+與菲洛嗪反應形成紫紅色化合物,,在 562nm 處有特征吸收峰。堿性條件下,,血清轉(zhuǎn)鐵蛋
白可以與 Fe3+結(jié)合,,剩余未結(jié)合的 Fe3+可以被還原成 Fe2+,此時吸光度 A1 與未結(jié)合 Fe3+數(shù)
量正相關(guān),;酸化后,,轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的 Fe3+釋放,并且進一步被還原成 Fe2+ ,,此時吸光度 A2
與總 Fe3+數(shù)量正相關(guān),。A2 減 A1 與 TIBC 濃度呈正比,。
自備實驗用品及儀器:
天平、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96 孔板,、蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體 30mL×1 瓶,,4℃保存,。
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存,。
試劑三:液體 5mL×1 瓶,,4℃避光保存。(臨用前根據(jù)用量將 A 液和 B 液按 1:1 混合)
試劑四:液體 7mL×1 瓶,,4℃保存,。
測定操作表:
1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min,,調(diào)節(jié)波長至 562nm,。
2、操作表
對照管 測定管
血清(μL) 40
試劑一(μL) 320 280
試劑二(μL) 40 40
混勻,,37℃,,10min
試劑三(μL) 40 40
混勻,37℃,,5min,,對照管調(diào)零,取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A1,,測完后立即加入試劑四
試劑四(μL) 60 60
混勻,,37℃,5min,,對照管調(diào)零,,取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板測定 562nm 處吸光值
A2。ΔA=A2-A1,。
血清總鐵結(jié)合力計算公式:
總鐵結(jié)合能力定義:37℃條件下,,每升血清結(jié)合 Fe3+的 μmol 數(shù)。
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.5478x+0.0281,,R
2
=0.9981
總鐵結(jié)合能力 TIBC(μmol/L)=(ΔA-0.0281)÷0.5478×V 反總÷V 樣= 20.99×(ΔA-0.0281)
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.2739x+0.0281,,R
2
=0.9981
總鐵結(jié)合能力 TIBC(μmol/L)=(ΔA-0.0281)÷0.2739×V 反總÷V 樣= 41.98×(ΔA-0.0281)
V 反總:反應總體積,0.46mL,;V 樣:反應中樣本體積,,0.04mL
注意事項:
1. 吸光值大于 0.8,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù),。
2. 試劑二,、試劑三有一定的毒性,操作時請做好防護措施,。
3. 檢測限為 4.78μmol/L,。