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豬瘟（CSF）酶聯(lián)免疫分析
閱讀：385 發(fā)布時間：2020-10-14豬瘟（CSF)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
96T
使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中豬瘟（CSF)表達(dá),。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬瘟（CSF)表達(dá),。用純化的豬瘟（CSF)抗體包被微
孔板，制成固相抗體,，可與樣品中豬瘟（CSF)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成
分后再與 HRP 標(biāo)記的豬瘟（CSF)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗
滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終
的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，與 CUTOFF 值相比較,，從而判定
標(biāo)本中豬瘟（CSF)的存在與否,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
20ml×1 瓶
7
終止液
6ml×1 瓶
2
酶標(biāo)試劑
6ml×1 瓶
8
陽性對照
0.5ml×1 瓶
3
酶標(biāo)包被板
12 孔×8 條
9
陰性對照
0.5ml×1 瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1 瓶
10
說明書
1 份
5
顯色劑 A 液
6ml×1 瓶
11
封板膜
2 張
6
顯色劑 B 液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能
馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 5 次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為豬瘟（CSF)陰性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為豬瘟（CSF)陽性
,。
注意事項
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時,，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸,，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月