技術(shù)文章
如何看流式細胞術(shù)結(jié)果中的圖
閱讀:1018 發(fā)布時間:2020-9-22
Q1:坐標軸的意義,?
1,、 單參數(shù)直方圖
每一個細胞單參數(shù)的測量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計分布,以直方圖的方式來顯示,。在圖中,,橫坐標表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,其單位是道數(shù)(channel),,可以是線形(line)或者對數(shù)(log),??v坐標一般是相對細胞/粒子數(shù)(count)!
2,、 二維圖
在二維圖的中,,橫坐標/縱坐標都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,可以是線形(line)或者對數(shù)(log),。雙參數(shù)圖可以將樣品細胞群分開,,從而方便對感興趣的細胞進行分析。
Q2:“Gate”和 “Regin”,?
設(shè)門是流式細胞分析中一種重要的技術(shù),,只有通過佳的設(shè)門方式,才能準確地獲取和分析數(shù)據(jù),,從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息,。
On-line gating(threshold gating)監(jiān)測/獲取數(shù)據(jù)
Off-line gating: 分析實驗數(shù)據(jù) 散射光設(shè)門/熒光設(shè)門 散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門
多重邏輯門(組合門)多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)
其它: G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
流式圖中的顏色為區(qū)分不同細胞群而人為, 與熒光顏色無關(guān)!!
Q4:流式圖中的陰/陽(N/P)如何劃分?
如何做M1陰性界限?實際上,,這個M1的劃分*是根據(jù)陰性(同型)對照來的!如下圖:左圖為同型對照,,即:您所檢測的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達量,,可以理解為背景、靜息狀態(tài)下,、基礎(chǔ)水平,、未受刺激時等。右圖即陽性組,,也就是接受刺激后,,功能狀態(tài)下、藥物作用后等,。
Q5: 這么巧,,陰性正好在101劃分?,?
其實, 我們可以人為地將電壓,,放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小,使陰性的右邊界在某一個值上,,(通常劃在101附近)這樣后期做sample時好看,!當然也可以調(diào)到102,103次方,。
Q6:為什么要進行熒光補償,?
流式細胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標記抗體進行染色,而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊,。
“熒光補償”這個術(shù)語是指修正熒光滲漏的過程,,如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號,。